小鼠腸道菌群恢復(fù)重建對感染免疫影響的研究.pdf

1、目的：
　　 1．沿用實(shí)驗(yàn)室成熟的方法建立重度菌群失衡小鼠模型，分別利用腸道優(yōu)勢菌群定量回灌和正常小鼠糞便定量回灌的方法，對重度菌群失衡模型小鼠進(jìn)行干預(yù)，以達(dá)菌群的恢復(fù)重建。
　　 2．分析小鼠腸道菌群恢復(fù)重建后小鼠腸粘免疫指標(biāo)及血液常規(guī)檢查指標(biāo)的變化，探討腸道優(yōu)勢菌群對機(jī)體免疫系統(tǒng)的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．采用抗生素頭孢曲松鈉灌胃的方式建立小鼠腸道重度菌群失衡模型。以頭孢曲松鈉終濃度為8g/

2、kg/d的劑量，連續(xù)灌胃8天，分析腸道菌群，建立小鼠重度菌群失衡模型。
　　 2．通過雙歧桿菌、乳酸桿菌、類桿菌、大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、消化球菌、韋榮球菌、腸球菌、梭桿菌等10種腸道優(yōu)勢菌群定量回灌的方法以求菌群重建。
　　 3．通過正常小鼠糞便定量回灌的方法以求菌群重建。
　　 4．利用ELISA法檢測各組腸粘膜分泌性免疫球蛋白SIgA與β-defensin分泌量變化；RT-PCR技術(shù)及免疫組化法檢測各組

3、腸粘膜粘液素Mucin2、Mucin3，防御素β-defensin含量的變化；
　　 5．采集各組小鼠血液，進(jìn)行血液分析。
　　 結(jié)果：
　　 1．針對重度菌群失衡小鼠，利用菌群回灌的方法恢復(fù)3周，12種腸道優(yōu)勢菌中有10種菌(包括：雙歧桿菌、乳酸桿菌、類桿菌、大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、消化球菌、韋榮球菌、腸球菌、梭桿菌)得以恢復(fù)，1種菌(優(yōu)桿菌)始未檢出；1種菌(酵母菌)未得到恢復(fù)。重建率：90.9％。

4、>　　 2．針對重度菌群失衡小鼠，利用糞便回灌的方法恢復(fù)3周，12種腸道優(yōu)勢菌中有9種菌(包括：雙歧桿菌、乳酸桿菌、類桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、消化球菌、韋榮球菌、腸球菌、梭桿菌)得以恢復(fù)，1種菌(優(yōu)桿菌)始終未檢出；2種菌(大腸桿菌、酵母菌)未得到恢復(fù)。重建率：81.8%。
　　 3．與正常組比較，重度菌群失衡組小鼠小腸sIgA分泌量下降呈顯著變化(P＜0.05)；小腸β-defensin分泌量呈顯著上升趨勢(P＜0.05)；

5、粘液層中的粘液素Mucin2、Mucin3、β-defensin在mRNA水平的表達(dá)與正常小鼠相比明顯增強(qiáng)。菌群重建后，sIgA分泌量呈回升趨勢，菌群回灌組恢復(fù)效果最為明顯；小腸β-defensin分泌量呈漸緩升高趨勢；粘液素Mucin2、Mucin3在mRNA水平的表達(dá)呈恢復(fù)趨勢。
　　 4．與正常組比較，重度菌群失衡組小鼠外周血中白細(xì)胞數(shù)上升，單核細(xì)胞數(shù)下降；自然恢復(fù)組白細(xì)胞總數(shù)呈繼續(xù)上升趨勢，單核細(xì)胞早期恢復(fù)，隨時間呈上升

6、趨勢，高于正常值；糞便回灌恢復(fù)重建后，白細(xì)胞總數(shù)呈繼續(xù)上升，單核細(xì)胞無恢復(fù)；菌群回灌恢復(fù)重建后，白細(xì)胞總數(shù)和單核細(xì)胞基本恢復(fù)。
　　 結(jié)論：
　　 1．利用腸道優(yōu)勢菌群回灌和正常小鼠糞便回灌兩種方法在一周內(nèi)均可實(shí)現(xiàn)重度菌群失衡后的菌群重建，三周內(nèi)恢復(fù)接近正常水平，菌群回灌方法優(yōu)于糞便回灌方法。
　　 2．隨著腸道優(yōu)勢菌群的恢復(fù)，SIgA分泌量回升；β-防御素分泌量增加；同時腸黏膜上皮粘液素表達(dá)量呈恢復(fù)趨勢；防御素