海藻糖對角質(zhì)形成細胞的非MTOR依賴性自噬調(diào)控機制及其抗紫外線損傷效應(yīng)研究.pdf

1、目的:
　　紫外線是皮膚常見的應(yīng)激源。目前紫外線照射如何對角質(zhì)形成細胞進行自噬調(diào)節(jié)并不清楚。
　　MTOR蛋白是哺乳動物細胞中的重要信號調(diào)節(jié)因子。MTOR信號在角質(zhì)形成細胞中的作用仍不清楚。
　　研究表明海藻糖通過誘導哺乳動物細胞自噬發(fā)揮有益作用。然而，無論是海藻糖或其他糖類是否可以誘導角質(zhì)形成細胞自噬仍未知。自噬誘導劑海藻糖是否具有紫外線保護效應(yīng)仍未知。
　　方法:
　　對原代角質(zhì)形成細胞給予不同劑量UV

2、B照射，在不同的時間點分析自噬流和自噬體形成。UVB照射后，使用雷帕霉素孵育分析自噬抑制是否可以恢復(fù)。
　　人角質(zhì)形成細胞系HaCaT細胞和原代角質(zhì)形成細胞給予MTOR抑制劑后，分析自噬調(diào)控和MTOR信號。分析MTOR抑制劑處理對UVB和UVA暴露后的DNA損傷信號、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、JNK和凋亡。
　　對HaCaT細胞給予不同濃度的海藻糖處理，孵育至不同的時間點，觀測自噬標志性分子事件的變化。進而，分析自噬關(guān)鍵調(diào)控信號。給予葡萄

3、糖、蔗糖、麥芽糖、棉子糖和山梨醇處理分析自噬調(diào)控變化。分析海藻糖處理對UVB損傷的HaCaT細胞的LDH釋放、克隆形成以及凋亡活性。
　　結(jié)果:
　　UVB照射抑制人角質(zhì)形成細胞自噬流，但MTOR信號下調(diào)，且雷帕霉素不能恢復(fù)自噬抑制。
　　角質(zhì)形成細胞MTOR信號對MTOR抑制劑雷帕霉素、依維莫司、Torin1和pp242敏感，但MTOR下游信號的調(diào)控狀態(tài)不同。僅有雷帕霉素可以誘導自噬。MTOR信號對UVB不敏感，但對

4、UVA敏感。雷帕霉素、依維莫司或pp242處理不影響UVB所誘導產(chǎn)生的系列細胞事件，包括BIP和PERK下調(diào)，組蛋白H2A和JNK激活以及caspase3和PARP剪切。
　　海藻糖處理增加HaCaT細胞LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)換，AO染色陽性囊泡和GFP-LC3點狀聚集。說明具有可以誘導自噬。海藻糖處理并沒有影響MTOR信號，這表明海藻糖誘導的自噬通過非MTOR依賴性途徑。在蔗糖或棉子糖處理的HaCaT細胞中也可以觀察到非MTO

5、R依賴性自噬誘導，但在葡萄糖、麥芽糖和山梨醇處理的HaCaT細胞中則不能觀測到這種誘導，表明自噬誘導能力不是糖類的共性。雖然海藻糖處理對細胞增殖具有抑制作用，但它對暴露于UVB的細胞具有提高細胞活力和抑制異常克隆形成的作用，并且對UVB誘導的凋亡沒有抑制作用。
　　結(jié)論:
　　UVB以非MTOR依賴性方式抑制角質(zhì)形成細胞自噬。
　　抑制角質(zhì)形成細胞MTOR信號可以不伴隨自噬誘導，在UVB觸發(fā)的細胞反應(yīng)中MTOR通路不發(fā)