海藻糖對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的非MTOR依賴性自噬調(diào)控機(jī)制及其抗紫外線損傷效應(yīng)研究.pdf

1、目的:
　　紫外線是皮膚常見的應(yīng)激源。目前紫外線照射如何對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行自噬調(diào)節(jié)并不清楚。
　　MTOR蛋白是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的重要信號(hào)調(diào)節(jié)因子。MTOR信號(hào)在角質(zhì)形成細(xì)胞中的作用仍不清楚。
　　研究表明海藻糖通過誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞自噬發(fā)揮有益作用。然而，無論是海藻糖或其他糖類是否可以誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬仍未知。自噬誘導(dǎo)劑海藻糖是否具有紫外線保護(hù)效應(yīng)仍未知。
　　方法:
　　對(duì)原代角質(zhì)形成細(xì)胞給予不同劑量UV

2、B照射，在不同的時(shí)間點(diǎn)分析自噬流和自噬體形成。UVB照射后，使用雷帕霉素孵育分析自噬抑制是否可以恢復(fù)。
　　人角質(zhì)形成細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞和原代角質(zhì)形成細(xì)胞給予MTOR抑制劑后，分析自噬調(diào)控和MTOR信號(hào)。分析MTOR抑制劑處理對(duì)UVB和UVA暴露后的DNA損傷信號(hào)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、JNK和凋亡。
　　對(duì)HaCaT細(xì)胞給予不同濃度的海藻糖處理，孵育至不同的時(shí)間點(diǎn)，觀測(cè)自噬標(biāo)志性分子事件的變化。進(jìn)而，分析自噬關(guān)鍵調(diào)控信號(hào)。給予葡萄

3、糖、蔗糖、麥芽糖、棉子糖和山梨醇處理分析自噬調(diào)控變化。分析海藻糖處理對(duì)UVB損傷的HaCaT細(xì)胞的LDH釋放、克隆形成以及凋亡活性。
　　結(jié)果:
　　UVB照射抑制人角質(zhì)形成細(xì)胞自噬流，但MTOR信號(hào)下調(diào)，且雷帕霉素不能恢復(fù)自噬抑制。
　　角質(zhì)形成細(xì)胞MTOR信號(hào)對(duì)MTOR抑制劑雷帕霉素、依維莫司、Torin1和pp242敏感，但MTOR下游信號(hào)的調(diào)控狀態(tài)不同。僅有雷帕霉素可以誘導(dǎo)自噬。MTOR信號(hào)對(duì)UVB不敏感，但對(duì)

4、UVA敏感。雷帕霉素、依維莫司或pp242處理不影響UVB所誘導(dǎo)產(chǎn)生的系列細(xì)胞事件，包括BIP和PERK下調(diào)，組蛋白H2A和JNK激活以及caspase3和PARP剪切。
　　海藻糖處理增加HaCaT細(xì)胞LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)換，AO染色陽(yáng)性囊泡和GFP-LC3點(diǎn)狀聚集。說明具有可以誘導(dǎo)自噬。海藻糖處理并沒有影響MTOR信號(hào)，這表明海藻糖誘導(dǎo)的自噬通過非MTOR依賴性途徑。在蔗糖或棉子糖處理的HaCaT細(xì)胞中也可以觀察到非MTO

5、R依賴性自噬誘導(dǎo)，但在葡萄糖、麥芽糖和山梨醇處理的HaCaT細(xì)胞中則不能觀測(cè)到這種誘導(dǎo)，表明自噬誘導(dǎo)能力不是糖類的共性。雖然海藻糖處理對(duì)細(xì)胞增殖具有抑制作用，但它對(duì)暴露于UVB的細(xì)胞具有提高細(xì)胞活力和抑制異?？寺⌒纬傻淖饔?，并且對(duì)UVB誘導(dǎo)的凋亡沒有抑制作用。
　　結(jié)論:
　　UVB以非MTOR依賴性方式抑制角質(zhì)形成細(xì)胞自噬。
　　抑制角質(zhì)形成細(xì)胞MTOR信號(hào)可以不伴隨自噬誘導(dǎo)，在UVB觸發(fā)的細(xì)胞反應(yīng)中MTOR通路不發(fā)