血紅素氧合酶對(duì)長(zhǎng)波紫外線(xiàn)導(dǎo)致人體皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞損傷作用的初步研究.pdf

1、NI幺_I素氧合酶對(duì)長(zhǎng)波紫外線(xiàn)導(dǎo)致人體皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞損傷作用的初步研究重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文(學(xué)術(shù)學(xué)位)學(xué)生姓名：許若頎指導(dǎo)教師：鐘莉教授專(zhuān)業(yè)：生物學(xué)學(xué)科門(mén)類(lèi)：理學(xué)重慶大學(xué)生物工程學(xué)院二O一二年四月堊瘞_人堂堡堂垡迨塞中文摘要—————————————————————————————————————————————————————————————一!二=!!!蘭摘要背景：紫外線(xiàn)A(ultravioletA，UVA)照射皮膚可產(chǎn)生紅斑等急

2、性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致皮膚光老化、皮膚光敏作用和多種皮膚疾病的發(fā)生，甚至誘發(fā)皮膚癌。血紅素氧合酶(hemeoxygenase，HO)是一種廣泛存在于機(jī)體內(nèi)的抗氧化酶，能保護(hù)多種組織和器官抵抗外界刺激引起的氧化損傷，但其在抵抗UVA照射引起的皮膚細(xì)胞損傷中的作用研究較少。目的：檢測(cè)不同劑量的UVA照射(100、250、500kJ／m2)對(duì)人體皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT細(xì)胞)的氧化損傷作用；觀察Bachl(BTBandCNChomology1t

3、ranscriptionfactor)的抑制對(duì)不同劑量UVA照射(250、500kJ／m2)引起的HaCaT細(xì)胞損傷的影響，觀察HO缺失對(duì)生理劑量250kJ／m2UVA照射引起的HaCaT細(xì)胞損傷的影響，以探究Bachl和HO是否能調(diào)節(jié)UVA照射導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。方法：①細(xì)胞培養(yǎng)：用含有10％體積胎牛血清的RMPI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞，接種于六孔板、培養(yǎng)皿或96孔板中。②紫外線(xiàn)照射：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)定時(shí)定量照射培養(yǎng)細(xì)胞，并分別于U

4、VA照射前進(jìn)行基因干擾預(yù)處理。③細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)：用鬼筆環(huán)肽和DAPI對(duì)各組HaCaT細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞染色，并在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞骨架和細(xì)胞核。④細(xì)胞活性檢測(cè)：采用MTS法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組HaCaT細(xì)胞的增殖活性。⑤細(xì)胞活性氧族(reactiveoxygenspecies，ROS)水平檢測(cè)：熒光探針DHE染色檢測(cè)各組HaCaT細(xì)胞內(nèi)的ROS水平。⑥細(xì)胞DNA損傷檢測(cè)：運(yùn)用單細(xì)胞凝膠電泳法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組HaCaT細(xì)胞的DNA損傷。結(jié)果：①不同劑量UV

5、A照射對(duì)HaCaT細(xì)胞損傷的影響：與未照射組細(xì)胞相比，小劑量100kJ／m2UVA照射組細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞活性均無(wú)明顯的差異，細(xì)胞ROS水平微弱升高，細(xì)胞DNA損傷較輕；生理劑量250kJ／m2UVA照射組細(xì)胞出現(xiàn)輕微皺縮和少量細(xì)胞碎片，細(xì)胞存活率明顯下降，細(xì)胞ROS水平和細(xì)胞DNA損傷明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p005)；大劑量500kJ／m2UVA照射組細(xì)胞受損傷情況較為嚴(yán)重，與250kJ／m2UVA照射組相比，細(xì)胞皺縮情況和細(xì)胞碎片