雙酚A對成年雄性大鼠生殖系統(tǒng)蛋白乙?；揎椀挠绊?pdf

1、目的：雙酚A(BPA)是一種典型的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（EDC），具有類雌激素或拮抗雄激素的效應(yīng)。近年來在“安全”劑量下，仍然有報道發(fā)現(xiàn)BPA父代暴露能通過雄性生殖系DNA甲基化修飾引起子代功能變化。但是，這樣的BPA暴露能否通過另一種重要的表觀遺傳修飾途徑—蛋白乙?；揎棸l(fā)揮同樣的作用還尚無研究。結(jié)合本課題組之前的研究，父代大鼠“安全”劑量的BPA暴露不僅能引起父代的空間記憶行為損傷，并且能夠?qū)ψ哟斐赏瑯拥挠绊?，本次研究旨在探討“安全?/p>

2、劑量BPA暴露是否對成年雄性大鼠生殖系蛋白乙?；揎椩斐捎绊?，并對其可能的潛在分子機制進行初步的探索。
　　方法：SPF級成年雄性Wistar大鼠20只（150-180g）。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機等分為2組，分別攝入普通對照飼料和50μg/kg/day雙酚A（BPA）飼料。全部大鼠持續(xù)干預(yù)35周，計算每日食物攝入量，并且每周記錄各組大鼠體重。全部大鼠在干預(yù)35周后處死。取睪丸、附睪計算臟器系數(shù)。取一側(cè)附睪組織切開孵育精子，取附睪液

3、均勻涂布在載玻片上，計算精子畸形率。其余所需組織-80℃保存?zhèn)溆?，部分采用石蠟包埋處理備用。采用伊紅-蘇木素染色（HE-staining）睪丸石蠟切片觀察兩組大鼠睪丸組織學(xué)形態(tài)。TUNEL法處理睪丸石蠟切片后，在熒光顯微鏡下觀察兩組大鼠睪丸組織DNA斷裂及細(xì)胞凋亡的狀況。用免疫印跡（western blot, WB）法檢測兩組大鼠腎臟（體細(xì)胞組織）和睪丸（生殖器官組織）蛋白泛乙酰化水平的變化。同時用WB檢測睪丸組織重要蛋白組蛋白H3，H

4、4乙?；?，以及組蛋白去乙?；窼irtuin-1(Sirt1)、窖蛋白-1（Caveolin-1，Cav-1）以及雌激素受體（ERα、ERβ和GPER）的蛋白表達(dá)水平。用免疫共沉淀（immunoprecipitation，IP）檢測Cav-1蛋白乙?；?以及Cav-1與Sirt1、ERβ的結(jié)合水平及其相互作用的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.與對照組相比，BPA組大鼠體重和臟器系數(shù)沒有明顯變化（P>0.05）.2.與對照組相比，HE

5、染色BPA組大鼠睪丸組織形態(tài)沒有明顯差異；TUNEL法沒有發(fā)現(xiàn)異常凋亡；精子畸形率兩組也沒有明顯差別（P>0.05）。3.與對照組相比，無論在大鼠腎臟組織還是睪丸組織，BPA組蛋白泛乙?；矫黠@下降，特別是在17kDa和25kDa分子量附近。4.與對照組相比，BPA組的組蛋白H3K9，H3K27和H4K12的蛋白乙酰化水平明顯下降（P<0.05），其中組蛋白H3分子量為17KD，與泛乙?；Y(jié)果一致。同時組蛋白去乙酰化酶Sirt1的蛋白

6、表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）。5.與對照組相比，BPA組Cav-1蛋白表達(dá)水平并沒有明顯改變（P>0.05），但是其蛋白乙酰化水平明顯下降（P<0.05）。其蛋白分子量為~22kDa，這一結(jié)果與泛乙?；Y(jié)果一致。6.與對照組相比，BPA組雌激素受體ERα和GPER的蛋白表達(dá)水平?jīng)]有明顯差別（P>0.05），但ERβ蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）。7.與對照組相比，免疫共沉淀結(jié)果顯示BPA組與Cav-1結(jié)合的ERβ表達(dá)明顯升高（

7、P<0.05），同時與Cav-1結(jié)合的Sirt1表達(dá)明顯下降（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.本實驗條件下，“安全”劑量BPA暴露沒有直接引起大鼠生殖系統(tǒng)器質(zhì)性損傷及生殖功能的影響。2.“安全”劑量BPA暴露可能同時引起大鼠體細(xì)胞組織（腎臟）和生殖系統(tǒng)（睪丸）蛋白乙?；降母淖?，并且其生殖系統(tǒng)（睪丸）蛋白乙酰化水平的改變可能是BPA引起繼代遺傳現(xiàn)象的原因。3.“安全”劑量BPA暴露引起的蛋白乙酰化水平下降可能與其類雌激素作用有關(guān)