褪黑素對(duì)雙酚A致成年雄性大鼠生殖細(xì)胞DNA損傷的拮抗作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:環(huán)境內(nèi)分泌干擾物雙酚A(BPA)是工業(yè)生產(chǎn)環(huán)氧樹脂、聚碳酸酯和聚苯乙烯樹脂等的前體物質(zhì)。因加入BPA可以使聚碳酸酯等塑料產(chǎn)品變得無(wú)色透明、耐用和防摔，BPA被廣泛應(yīng)用于嬰幼兒奶瓶、食品包裝材料、塑料餐具和醫(yī)療器械等塑料行業(yè)。塑料制品的大量使用使得BPA在我們的生活中廣泛存在。因BPA的化學(xué)結(jié)構(gòu)與明確的人類致癌物(己)烯雌酚相似，BPA可能的遺傳毒性已經(jīng)引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。然而，關(guān)于BPA遺傳毒性的研究結(jié)果仍存在爭(zhēng)議，至今尚

2、未得到統(tǒng)一的結(jié)論。目前，有關(guān)BPA對(duì)雄性大鼠生殖細(xì)胞遺傳毒性的研究報(bào)道相對(duì)較少。本研究以BPA為研究對(duì)象，通過建立BPA亞急性暴露的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ吞剿鰾PA暴露對(duì)成年期SD雄性大鼠生殖細(xì)胞的遺傳毒性和抗氧化劑褪黑素(MT)對(duì)BPA所致毒性效應(yīng)的拮抗作用，以探討其可能的機(jī)制。
　　方法:SPF級(jí)8周齡健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為:(1)正常對(duì)照組;(2) MT處理組，MT10 mg/kg體重劑量腹腔注射;(3) BPA處理組，BPA20

3、0 mg/kg體重劑量經(jīng)口灌胃染毒;(4) MT預(yù)處理+BPA組，大鼠經(jīng)10 mg/kg的MT預(yù)處理30 min后再灌胃200 mg/kg劑量的BPA。每組10只動(dòng)物，連續(xù)處理10天。末次給藥24 h后，硫代巴比妥酸法測(cè)定睪丸組織中MDA含量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力;分離睪丸精母細(xì)胞，堿性彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)精母細(xì)胞DNA損傷，染色質(zhì)擴(kuò)散免疫染色γH2AX檢測(cè)粗線期精母細(xì)胞常染色體上γH2AX陽(yáng)性焦點(diǎn)數(shù)量;流式細(xì)胞檢測(cè)睪丸細(xì)胞群中不同DN

4、A含量亞細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)量;TUNEL熒光染色檢測(cè)生殖細(xì)胞凋亡;睪丸組織HE染色觀察睪丸組織病理形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果:①200 mg/kg體重劑量的BPA暴露10天對(duì)SD大鼠生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用，大鼠體重增量、生殖器官睪丸和附睪的重量及精子數(shù)量均未出現(xiàn)明顯變化(P＞0.05)。
　?、?00 mg/kg體重劑量的BPA處理SD大鼠10天引起了氧化損傷，睪丸組織中MDA含量升高， SOD活力降低（P＜0.01）。
　?、跙

5、PA暴露引起了睪丸精母細(xì)胞DNA損傷。精母細(xì)胞彗星參數(shù)TL，Tail DNA％，TM和OTM與對(duì)照組比較均顯著增加(P＜0.01); SD大鼠粗線期精母細(xì)胞常染色體上γH2AX陽(yáng)性焦點(diǎn)數(shù)量與對(duì)照組比較明顯增多(P＜0.01)。
　　④BPA處理顯著降低了睪丸細(xì)胞群中4C-DNA含量亞細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)量(P＜0.05)。尚未引起生殖細(xì)胞凋亡增多和睪丸組織病理形態(tài)學(xué)的變化。
　?、?0 mg/kg體重劑量的MT對(duì)SD大鼠進(jìn)行預(yù)處理

6、后減輕了氧化損傷，和BPA處理組比較睪丸組織內(nèi)MDA含量降低，SOD活力升高(P＜0.05)。
　　⑥MT預(yù)處理拮抗了BPA暴露引起的精母細(xì)胞DNA損傷。顯著降低了DNA損傷的程度(P＜0.01)和粗線期精母細(xì)胞常染色體上γH2AX陽(yáng)性焦點(diǎn)的數(shù)量(P＜0.05);并增加了睪丸細(xì)胞群中4C-DNA含量亞細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)量，與單獨(dú)的BPA處理組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:200 mg/kg BPA亞急性暴露