依賴CD23的ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機制中的作用.pdf

1、背景及目的：
　　變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)是耳鼻咽喉-頭頸外科的常見病之一,是由IgE介導(dǎo)的鼻黏膜的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病,嚴重影響著人們的日常生活,同時增加了社會負擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計變應(yīng)性鼻炎的全球平均發(fā)病率約為10％～25%,且隨著全球經(jīng)濟的發(fā)展和生存環(huán)境的改變,變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增長的趨勢,已成為亟待解決的全球性健康問題。
　　IgE作為最不豐富的免疫球蛋白類,主要通過與2種細胞表面受體之間的

2、相互作用而發(fā)揮其病理作用,即：高親和力受體FcεRI和低親和力受CD23（FcεRⅡ）, IgE和FcεRI的分子結(jié)構(gòu)之間的相互作用已經(jīng)研究的非常成熟，F(xiàn)cεRI已成為變應(yīng)性疾病治療中的的一個重要靶向。最新的IgE受體的分子結(jié)構(gòu)研究顯示，相較于與FcεRI的結(jié)合，IgE與CD23的結(jié)合位點具有更顯著的可變性，因此，CD23可能在IgE介導(dǎo)的變應(yīng)性疾病中扮演更為重要的角色。多項研究顯示，CD23在過敏性氣道及過敏性腸炎的發(fā)生中參與抗原提成

3、及跨上皮轉(zhuǎn)運。而在變應(yīng)性鼻炎的研究中也同樣發(fā)現(xiàn)，CD23表達在鼻黏膜的上皮細胞中，參與IgE的雙向轉(zhuǎn)運及IgE抗原復(fù)合物的單向轉(zhuǎn)運，從而啟動變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生。而CD23的表達是否影響變應(yīng)性鼻炎晚發(fā)相的發(fā)生，目前尚不明確。國外研究發(fā)現(xiàn)，在過敏性腸炎中存在依賴CD23的ERK信號通路，ERK信號通路的激活可進一步促進CCL20、IL8的釋放，從而介導(dǎo)炎癥的發(fā)生發(fā)展。變應(yīng)性鼻炎中是否存在相同的由CD23介導(dǎo)的信號通路參與變應(yīng)性鼻炎晚發(fā)相的炎癥

4、浸潤，值得進一步深入探討。
　　本研究通過檢測CD23及p-ERK、CCL20、IL-18在變應(yīng)性鼻炎大鼠模型中的表達并進行相關(guān)性研究，然后在體內(nèi)阻斷CD23，觀察其對下游ERK信號通路的影響，從而進一步解釋CD23對變應(yīng)性鼻炎整個發(fā)生過程的影響，試圖更深入的闡明變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機制，探尋變應(yīng)性鼻炎治療的新靶點。
　　實驗方法：
　　采用30只健康的SD大鼠建立實驗動物模型，雌雄不限，將大鼠隨機分為空白對照組(A組)、

5、AR組(B組)、抗CD23干預(yù)組(C組)，每組10只。實驗的早期模擬致敏階段，B組和C組大鼠用卵清蛋白聯(lián)合氫氧化鋁進行基礎(chǔ)致敏，而A組大鼠僅腹腔注射生理鹽水及氫氧化鋁，實驗的后期模擬激發(fā)階段，B組大鼠采用5%的卵清蛋白生理鹽水溶液滴鼻，每組均為隔天1次，共16天。C組大鼠則在卵清蛋白生理鹽水溶液滴鼻激發(fā)前30分鐘，給予抗CD23抗體滴鼻處理，而A組大鼠僅生理鹽水滴鼻。每組均為1次/天，連續(xù)10天。末次滴鼻激發(fā)完成后，記錄大鼠鼻部癥狀并注

6、射過量水合氯醛處死大鼠。HE染色觀察大鼠鼻粘膜組織病理學(xué)變化及嗜酸粒細胞浸潤程度,免疫熒光檢測CD23、CCL20在三組大鼠鼻腔黏膜的表達量、Western Blot檢測p-ERK的表達量。ELISA法檢測三組大鼠血清中OVA-IgE、LTC4、ECP和鼻腔灌洗液p-ERK、CCL20、IL8的水平。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠的撓鼻及噴嚏次數(shù)，OVA-sIgE及LTC4的水平濃度，AR組明顯高于對照組，而CD23抗體干預(yù)組則

7、較變應(yīng)性鼻炎組明顯降低，三組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.大鼠鼻粘膜嗜酸性粒細胞的浸潤程度與ECP的水平，AR組明顯高于對照組，而CD23抗體干預(yù)組則較變應(yīng)性鼻炎組明顯降低，三組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.CD23在正常對照組、AR組、CD23抗體干預(yù)組大鼠鼻黏膜中的表達量分別為51.32±10.23、103.55±19.98、72.63±14.53，三組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=

8、78.41，P＜0.05）；
　　4.p-ERK在空白對照組、變應(yīng)性鼻炎組及CD23抗體干預(yù)組三組鼻腔灌洗液中的表達量依次為79.37±16.18，167.82±31.42，117.43±24.16，三組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=108.46，P＜0.05）。
　　5. CCL20在空白對照組、變應(yīng)性鼻炎組及CD23抗體干預(yù)組三組鼻腔灌洗液中的表達量依次為40.82±7.93，116.23±23.17，63.47±12.1

9、6，三組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=146.13，P＜0.05).
　　6.IL8在空白對照組、變應(yīng)性鼻炎組及CD23抗體干預(yù)組三組鼻腔灌洗液中的表達量依次為18.32±3.79，72.93±15.21，31.26±6.21，三組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=108.46，P＜0.05).
　　7.經(jīng)Pearson相關(guān)性檢驗分析，在變應(yīng)性鼻炎組中CD23的表達量與鼻腔灌洗液中p-ERK的水平呈正相關(guān)（r=0.613，P＜0.0

10、5），鼻腔灌洗液中p-ERK的水平與CCL20、IL8的水平也呈正相關(guān)（r=0.792，r=0.813 P＜0.05）。鼻腔灌洗液中IL8的水平與嗜酸性粒細胞也呈正相關(guān)（r=0.846，P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.CD23不僅參與介導(dǎo)跨上皮細胞轉(zhuǎn)運 IgE和 IgE免疫復(fù)合物，啟動變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生，同時可通過激活ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進CCL20、IL8的釋放，從而招募和趨化中性粒細胞、T淋巴細胞及嗜酸性粒細胞導(dǎo)致