Smad蛋白在ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的作用及對血管平滑肌增殖的影響.pdf

1、血管平滑肌細胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)的增殖肥大是高血壓、動脈粥樣硬化等多種血管增殖性疾病共同的細胞病理基礎(chǔ)之一，研究表明在介導(dǎo)VSMC增殖肥大中起主要作用的是G蛋白偶聯(lián)受體通路、酪氨酸蛋白激酶(tyrosineproteinkinase,TPK)通路、整合素介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和轉(zhuǎn)化生長因子(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)/Smad通路。此外，還存在著許多已知和未

2、知的信號通路，它們在多個層次上發(fā)生交互調(diào)節(jié)，構(gòu)成復(fù)雜的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)，共同決定細胞的生物學(xué)行為。 已知ERK通路和TGF-β/Smad通路在許多細胞中可發(fā)生對話，共同協(xié)調(diào)細胞的一些生物學(xué)行為，并且這兩條通路都可促進VSMC的增殖。但在VSMC內(nèi)，這兩條通路是否存在交互調(diào)節(jié)及其它們之間發(fā)生交互調(diào)節(jié)的具體環(huán)節(jié)及分子機制目前還不清楚。 本實驗在原代培養(yǎng)人臍動脈平滑肌細胞(humanumbilicalarterysmoothm

3、usclecells，hUASMC)的基礎(chǔ)上，取3-15代hUASMC用于實驗，實驗分四組：對照組，血小板源性生長因子(plateletderivedgrowthfactor，PDGF)組，ERK阻斷劑(PD98059)組和PDGF+ERK阻斷劑組。繼續(xù)培養(yǎng)24h后，用MTT法測細胞的增殖活性，用免疫細胞化學(xué)技術(shù)測細胞內(nèi)核增殖抗原(proliferationofcellnucleusantigen,PCNA)、磷酸化ERK、磷酸化Sma

4、d2/3蛋白的表達；用RT-PCR法測細胞內(nèi)Smad2/3mRNA的表達。 結(jié)果：(1)與對照組相比，PDGF組hUASMC內(nèi)PCNA的表達明顯增強，MTT法測得A值也升高(P＜0.01)，ERK阻斷劑組和PDGF+ERK阻斷劑組hUASMC內(nèi)PCNA的表達和MTT法測得的A值比PDGF組明顯減少，與對照組無差異；(2)與對照組相比，PDGF組hUASMC內(nèi)磷酸化ERK的表達明顯增強(P＜0.01)，ERK阻斷劑組和PDGF+E

5、RK阻斷劑組hUASMC內(nèi)磷酸化ERK的表達比PDGF組明顯減少，與對照組無差異；(3)與對照組相比，PDGF組hUASMC內(nèi)磷酸化Smad2/3的表達明顯增強(P＜0.01)，ERK阻斷劑組和PDGF+ERK阻斷劑組hUASMC內(nèi)磷酸化Smad2/3的表達比PDGF組明顯減少，與對照組無差異；(4)各組間hUASMC內(nèi)Smad2/3mRNA的表達無差異。 結(jié)論：(1)PDGF可誘導(dǎo)hUASMC增殖，在此過程中ERK通路發(fā)揮重要