Smad蛋白在ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的作用及對(duì)血管平滑肌增殖的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)的增殖肥大是高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化等多種血管增殖性疾病共同的細(xì)胞病理基礎(chǔ)之一,研究表明在介導(dǎo)VSMC增殖肥大中起主要作用的是G蛋白偶聯(lián)受體通路、酪氨酸蛋白激酶(tyrosineproteinkinase,TPK)通路、整合素介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)/Smad通路。此外,還存在著許多已知和未

2、知的信號(hào)通路,它們?cè)诙鄠€(gè)層次上發(fā)生交互調(diào)節(jié),構(gòu)成復(fù)雜的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò),共同決定細(xì)胞的生物學(xué)行為。 已知ERK通路和TGF-β/Smad通路在許多細(xì)胞中可發(fā)生對(duì)話,共同協(xié)調(diào)細(xì)胞的一些生物學(xué)行為,并且這兩條通路都可促進(jìn)VSMC的增殖。但在VSMC內(nèi),這兩條通路是否存在交互調(diào)節(jié)及其它們之間發(fā)生交互調(diào)節(jié)的具體環(huán)節(jié)及分子機(jī)制目前還不清楚。 本實(shí)驗(yàn)在原代培養(yǎng)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(humanumbilicalarterysmoothm

3、usclecells,hUASMC)的基礎(chǔ)上,取3-15代hUASMC用于實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)分四組:對(duì)照組,血小板源性生長(zhǎng)因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)組,ERK阻斷劑(PD98059)組和PDGF+ERK阻斷劑組。繼續(xù)培養(yǎng)24h后,用MTT法測(cè)細(xì)胞的增殖活性,用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)測(cè)細(xì)胞內(nèi)核增殖抗原(proliferationofcellnucleusantigen,PCNA)、磷酸化ERK、磷酸化Sma

4、d2/3蛋白的表達(dá);用RT-PCR法測(cè)細(xì)胞內(nèi)Smad2/3mRNA的表達(dá)。 結(jié)果:(1)與對(duì)照組相比,PDGF組hUASMC內(nèi)PCNA的表達(dá)明顯增強(qiáng),MTT法測(cè)得A值也升高(P<0.01),ERK阻斷劑組和PDGF+ERK阻斷劑組hUASMC內(nèi)PCNA的表達(dá)和MTT法測(cè)得的A值比PDGF組明顯減少,與對(duì)照組無(wú)差異;(2)與對(duì)照組相比,PDGF組hUASMC內(nèi)磷酸化ERK的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01),ERK阻斷劑組和PDGF+E

5、RK阻斷劑組hUASMC內(nèi)磷酸化ERK的表達(dá)比PDGF組明顯減少,與對(duì)照組無(wú)差異;(3)與對(duì)照組相比,PDGF組hUASMC內(nèi)磷酸化Smad2/3的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01),ERK阻斷劑組和PDGF+ERK阻斷劑組hUASMC內(nèi)磷酸化Smad2/3的表達(dá)比PDGF組明顯減少,與對(duì)照組無(wú)差異;(4)各組間hUASMC內(nèi)Smad2/3mRNA的表達(dá)無(wú)差異。 結(jié)論:(1)PDGF可誘導(dǎo)hUASMC增殖,在此過(guò)程中ERK通路發(fā)揮重要

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