P物質(zhì)受體小干擾RNA在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中作用及其對RANTES影響的研究.pdf

1、[背景]:變應(yīng)性鼻炎(Allergic rhinitis，AR)患病率逐年增加，影響了人類的生活質(zhì)量。研究AR發(fā)病機(jī)理，從基因水平探求新的治療方法，已成為本領(lǐng)域的前沿方向。P物質(zhì)(Substance P，SP)是由11個氨基酸組成的神經(jīng)肽，通過與效應(yīng)細(xì)胞表面P物質(zhì)受體即速激肽-1受體(Neurokinin-1 receptor，NK-1R)結(jié)合，在AR炎性反應(yīng)中發(fā)揮著至關(guān)重要作用。P物質(zhì)可增加鼻黏膜局部血管滲透性，促進(jìn)組織水腫，同時也能

2、引起趨化因子表達(dá)、釋放，誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)等炎性細(xì)胞的趨化、浸潤，從而激發(fā)并加重AR鼻黏膜炎癥反應(yīng)。SP主要通過與特異性NK-1R相結(jié)合發(fā)揮病理生理作用，NK-1R的數(shù)量和功能直接影響到AR中SP的功能。研究表明SP與NK-1R在AR中具有相互促進(jìn)的正反饋?zhàn)饔?，且抑制SP的表達(dá)，可以降低NK-1R水平，反之，通過NK-1R拮抗劑或者基因敲除、基因干擾等方式抑制NK-1R表達(dá)，也能使SP的表達(dá)降低[4]。我們運(yùn)用RNA干擾技術(shù)，自

3、行設(shè)計(jì)合成了P物質(zhì)受體小干擾RNA(Neurokinin-1receptor-siRNA，NK-1R-siRNA)，探討NK-1R-siRNA在AR發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　[目的]:觀察AR大鼠模型RANTES的表達(dá)，分析RANTES表達(dá)與AR發(fā)病之間的關(guān)系;探討NK-1 R-siRNA對RANTES表達(dá)的影響，從而為AR基因治療提供理論基礎(chǔ)。
　　[方法]:健康SD大鼠隨機(jī)分成基因治療組，陰性基因?qū)φ战M，AR未治療組，正常

4、對照組。用卵清蛋白(OVA)致敏，制備AR大鼠動物模型，評估各組AR癥狀及HE染色鼻黏膜病理學(xué)變化，檢測鼻黏膜和鼻腔灌洗液中EOS計(jì)數(shù)，觀察鼻黏膜免疫組化中NK-1R和RANTES的表達(dá)，ELISA法檢測鼻黏膜中NK-1R含量和鼻腔灌洗液中P物質(zhì)及RANTES含量變化，并采用Real time RT-PCR定量檢測鼻黏膜中NK-1R及RANTES基因表達(dá)。
　　[結(jié)果]:①癥狀學(xué)觀察:基因治療組大鼠模型中噴嚏計(jì)數(shù)、撓鼻計(jì)數(shù)以及鼻腔

5、分泌量較AR未治療組和陰性基因?qū)φ战M相比，均顯著減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　②鼻腔灌洗液EOS計(jì)數(shù):基因治療組鼻腔灌洗液EOS計(jì)數(shù)明顯少于AR未治療組和陰性基因?qū)φ战M(P＜0.05)。
　　③鼻黏膜病理學(xué):AR未治療組和陰性基因?qū)φ战M鼻黏膜上皮受損，炎癥反應(yīng)明顯，血管擴(kuò)張，黏膜及黏膜下固有層大量EOS浸潤;正常對照組黏膜結(jié)構(gòu)正常，無明顯EOS浸潤;基因治療組炎癥反應(yīng)輕微，未見明顯EOS浸潤。
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6、黏膜NK-1R基因表達(dá):基因治療組NK-1R表達(dá)明顯低于AR未治療組和陰性基因?qū)φ战M，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)
　?、荼乔还嘞匆篠P含量:與正常對照組和基因治療組相比，AR未治療組和陰性基因?qū)φ战M灌洗液SP含量顯著升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　?、薇乔还嘞匆篟ANTES含量:與正常對照組和基因治療組相比，AR未治療組和陰性基因?qū)φ战M灌洗液RANTES含量顯著升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。