P物質(zhì)受體小干擾RNA在變應性鼻炎發(fā)病機制中作用及其對RANTES影響的研究.pdf

1、[背景]:變應性鼻炎(Allergic rhinitis，AR)患病率逐年增加，影響了人類的生活質(zhì)量。研究AR發(fā)病機理，從基因水平探求新的治療方法，已成為本領域的前沿方向。P物質(zhì)(Substance P，SP)是由11個氨基酸組成的神經(jīng)肽，通過與效應細胞表面P物質(zhì)受體即速激肽-1受體(Neurokinin-1 receptor，NK-1R)結合，在AR炎性反應中發(fā)揮著至關重要作用。P物質(zhì)可增加鼻黏膜局部血管滲透性，促進組織水腫，同時也能

2、引起趨化因子表達、釋放，誘導嗜酸性粒細胞(EOS)等炎性細胞的趨化、浸潤，從而激發(fā)并加重AR鼻黏膜炎癥反應。SP主要通過與特異性NK-1R相結合發(fā)揮病理生理作用，NK-1R的數(shù)量和功能直接影響到AR中SP的功能。研究表明SP與NK-1R在AR中具有相互促進的正反饋作用，且抑制SP的表達，可以降低NK-1R水平，反之，通過NK-1R拮抗劑或者基因敲除、基因干擾等方式抑制NK-1R表達，也能使SP的表達降低[4]。我們運用RNA干擾技術，自

3、行設計合成了P物質(zhì)受體小干擾RNA(Neurokinin-1receptor-siRNA，NK-1R-siRNA)，探討NK-1R-siRNA在AR發(fā)病機制中的作用。
　　[目的]:觀察AR大鼠模型RANTES的表達，分析RANTES表達與AR發(fā)病之間的關系;探討NK-1 R-siRNA對RANTES表達的影響，從而為AR基因治療提供理論基礎。
　　[方法]:健康SD大鼠隨機分成基因治療組，陰性基因對照組，AR未治療組，正常

4、對照組。用卵清蛋白(OVA)致敏，制備AR大鼠動物模型，評估各組AR癥狀及HE染色鼻黏膜病理學變化，檢測鼻黏膜和鼻腔灌洗液中EOS計數(shù)，觀察鼻黏膜免疫組化中NK-1R和RANTES的表達，ELISA法檢測鼻黏膜中NK-1R含量和鼻腔灌洗液中P物質(zhì)及RANTES含量變化，并采用Real time RT-PCR定量檢測鼻黏膜中NK-1R及RANTES基因表達。
　　[結果]:①癥狀學觀察:基因治療組大鼠模型中噴嚏計數(shù)、撓鼻計數(shù)以及鼻腔

5、分泌量較AR未治療組和陰性基因對照組相比，均顯著減少，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　②鼻腔灌洗液EOS計數(shù):基因治療組鼻腔灌洗液EOS計數(shù)明顯少于AR未治療組和陰性基因對照組(P＜0.05)。
　?、郾丘つげ±韺W:AR未治療組和陰性基因對照組鼻黏膜上皮受損，炎癥反應明顯，血管擴張，黏膜及黏膜下固有層大量EOS浸潤;正常對照組黏膜結構正常，無明顯EOS浸潤;基因治療組炎癥反應輕微，未見明顯EOS浸潤。
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6、黏膜NK-1R基因表達:基因治療組NK-1R表達明顯低于AR未治療組和陰性基因對照組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)
　?、荼乔还嘞匆篠P含量:與正常對照組和基因治療組相比，AR未治療組和陰性基因對照組灌洗液SP含量顯著升高，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　⑥鼻腔灌洗液RANTES含量:與正常對照組和基因治療組相比，AR未治療組和陰性基因對照組灌洗液RANTES含量顯著升高，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。