艾滋病毒潛伏感染細胞的體內(nèi)分布及關鍵抑制因素研究.pdf

1、艾滋病，又稱獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)，是人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的危害極大的感染性疾病。截止目前，全球仍有3900萬HIV感染者，占全球人口的5.4‰，是現(xiàn)代歷史上最嚴重的傳染性疾病之一。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)是目前對抗HIV感染的主要武器，能有效降低HIV感染者的病毒載量，延緩艾滋病發(fā)生，延長感染者壽命。但HAART不能使感染者免疫功能完全恢復正常，也不能徹底清除機體內(nèi)HIV病毒，停藥后病毒載量迅速反彈。

2、研究表明，病毒控制人群的反彈病毒來自宿主體內(nèi)重新激活的病毒潛伏感染細胞?？蒲腥藛T早已證實了HIV潛伏感染細胞的存在;而且現(xiàn)有高效HAART治療也不能完全清除體內(nèi)HIV潛伏感染細胞。因此，HIV潛伏感染細胞被認為是HIV感染治愈的主要障礙。
　　為實現(xiàn)HIV感染的治愈，科研人員探索了多種HIV潛伏感染細胞的清除策略，如模擬“密西西比嬰兒”的早期治療策略，模擬“柏林病人”的骨髓移植策略，直接靶向病毒潛伏感染細胞的激活與清除策略以及增強

3、機體抗病毒免疫的免疫抑制策略等，但上述策略的臨床效果及適用性均不夠理想;提示仍需要對病毒潛伏感染細胞及其影響因素進行深入的研究，特別是尚未突破的幾個關鍵科學問題:一、艾滋病毒潛伏感染細胞的體內(nèi)分布;二、抑制艾滋病毒反彈的關鍵因素。針對這兩關鍵科學問題，本研究通過基于流式細胞術的病毒潛伏感染細胞檢測策略的建立，檢測艾滋病毒潛伏感染細胞的體內(nèi)分布;同時，探尋艾滋病毒自然抑制模型中病毒有效控制的關鍵因素，深入研究艾滋病毒儲存庫分布和抑制的關鍵

4、機制，為HIV感染的治療策略研發(fā)提供研究思路與理論依據(jù)。
　　第一部分 艾滋病毒潛伏感染細胞的體內(nèi)分布研究
　　清除艾滋病毒潛伏感染細胞的首要任務是確定該細胞在體內(nèi)分布情況。鑒于艾滋病毒潛伏感染細胞生物學上的特殊性，本研究首先建立了一種新型的艾滋病毒潛伏感染細胞的檢測策略。通過比較SIV p27/gp41抗體細胞表面染色和SmartFlare技術在艾滋病毒復制陰性細胞分選中的優(yōu)劣，比較CD3/CD28免疫磁珠、LPS與PHA

5、在免疫細胞激活的差別，比較SIV p27抗體細胞內(nèi)染色法和FlowRNA技術在病毒潛伏感染細胞分析中的優(yōu)缺點;分別選擇SmartFlare技術、CD3/CD28免疫磁珠/LPS和FlowRNA技術用于后續(xù)研究，同時優(yōu)化實驗條件，建立基于流式細胞術的艾滋病毒潛伏感染細胞檢測策略(FlowVLIC)。比較發(fā)現(xiàn)該檢測策略檢測的病毒潛伏感染細胞規(guī)模位于QVOA法和前病毒DNA-PCR法的檢測結(jié)果之間，更符合艾滋病毒儲存庫的理論規(guī)模。之后，本研究

6、使用該檢測策略檢了RT-SHIV/恒河猴病毒抑制模型病毒潛伏感染細胞的組織、細胞分布，發(fā)現(xiàn)其病毒潛伏感染細胞主要分布于淋巴組織、腸道黏膜等部位，細胞類型以記憶性CD4+細胞為主。進一步，本研究還分析了不同部位、不同細胞來源潛伏病毒env、rt基因序列，發(fā)現(xiàn)潛伏病毒的整合位點與細胞類型存在一定的相關性，需進行更深入的機制研究。本研究首次初步確定了艾滋病毒潛伏感染細胞在非人靈長類動物模型體內(nèi)的組織、細胞分布。
　　第二部分 艾滋病毒自

7、然抑制的關鍵因素研究
　　為達到HIV功能性治愈，即在不施以抗病毒治療的前提下，機體也能有效的控制機體內(nèi)的病毒復制，探尋病毒抑制的關鍵因素至關重要。本實驗室前期使用SIV、SHIV病毒小劑量多次黏膜接種恒河猴，可高效誘導病毒自然抑制現(xiàn)象，類似于臨床的精英控制者，但其原因未知。本研究首先通過猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)病毒小劑量多次直腸接種恒河猴建立病毒自然抑制模型，同時設立正常對照組，然后從細胞免疫、體液免疫和固有免疫等多

8、個角度探尋病毒抑制的免疫機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)病毒抑制動物的細胞免疫和體液免疫未見明顯升高，甚至低于正常對照組;但兩組動物固有免疫反應存在明顯的差異，病毒抑制組高于正常對照組，提示固有免疫反應在病毒自然抑制現(xiàn)象中發(fā)揮一定的作用。此外，本研究還探尋了病毒靶細胞和固有抗病毒因子在該現(xiàn)象中發(fā)揮的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組動物不同組織的靶細胞數(shù)量和固有抗病毒因子表達和變異上沒有明顯差異。最后，本研究從感染病毒角度進行了探索，通過SGA方法獲得了模型感染的奠基者

9、(T/F)病毒，分析T/F病毒數(shù)量和適應性，發(fā)現(xiàn)病毒抑制動物的T/F病毒數(shù)量顯著少于正常對照動物，而且感染病毒適應性也明顯弱于正常對照動物?；谏鲜鼋Y(jié)果，提示機體的固有免疫反應和感染病毒特性在艾滋病毒自然抑制方面具有重要影響，后續(xù)在HIV感染治愈策略研究中需要考慮這些因素。
　　綜上所述，本研究通過建立基于流式細胞術的病毒潛伏感染細胞檢測策略，確定了恒河猴模型體內(nèi)的病毒潛伏感染細胞分布;建立的檢測方法也可用于后續(xù)HIV感染治療策略