MTSS1在肝癌細胞系中的生物學(xué)功能的研究.pdf

1、目的：研究DNMT3B調(diào)控MTSS1基因表達的可能機制，初步探索MTSS1在肝癌中的生物學(xué)功能。 方法：應(yīng)用ChIP的方法分析DNMT3B與MTSS1是否直接結(jié)合，以luciferase實驗分析DNMT3B結(jié)合MTSS1啟動子區(qū)對其活性的影響。分別構(gòu)建MTSS1 siRNA和MTSS1過表達穩(wěn)定表達載體，對肝癌細胞系進行轉(zhuǎn)染，建立MTSS1表達抑制和過表達的穩(wěn)定肝癌細胞系研究模型，以XTT法檢測MTSS1對肝癌細胞系增殖能力的影

2、響；企業(yè)技術(shù)檢測MTSS1對肝癌細胞系細胞周期的影響；軟瓊脂克隆形成實驗及結(jié)晶紫染色法檢測MTSS1對肝癌細胞系克隆形成能力的影響；以鼠成纖維細胞系NIH3T3作為研究對照，進一步驗證MTSS1的對克隆形成能力的影響。 結(jié)果：ChIP后行MTSS1上游的啟動子區(qū)PCR，F(xiàn)2（-864/-645）片段的位置有特異性的擴增，表明該片段與DNMT3B結(jié)合。luciferase實驗分析發(fā)現(xiàn)，DNMT3B通過與MTSS1的啟動子F2區(qū)結(jié)合

3、，抑制了MTSS1啟動子的活性。XTT法檢測細胞增殖能力的結(jié)果表明，MTSS1表達抑制前后及MTSS1過表達前后對肝癌細胞系的細胞增殖能力均無明顯的差別（p>0．05）。流式細胞儀檢測細胞周期結(jié)果顯示，MTSS1表達抑制細胞系7721-MTSS1-RNAi中G2M期細胞比例減少；相反，MTSS1高表達細胞系7703-MTSS1-3中G2M期細胞比例明顯增多。軟瓊脂克隆形成實驗檢測細胞克隆形成能力發(fā)現(xiàn)，MTSS1沉默細胞系7721-MTS

4、S1-RNAi比其對照細胞系7721-pSU的克隆形成能力增強；而在MTSS1高表達細胞系7703-MTSS1-3比其對照細胞系7703-PC克隆形成能力降低。平板克隆形成實驗結(jié)果與軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果一致。鼠成纖維細胞系中的研究結(jié)果，進一步表明MTSS1的過表達未使NIH3T3細胞克隆形成能力增加，與對照細胞系相比，兩者的克隆形成率均小于1％。 結(jié)論：本研究得出以下結(jié)論：1、DNMT3B通過與MTSS1啟動子區(qū)特異性的結(jié)合，