阿霉素誘導人膽管癌細胞系耐藥株的建立及其生物學特性評價.pdf

1、目的：多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)是腫瘤化學治療的主要障礙，使得膽管癌的化學治療效果差，本研究擬在源于人的肝門部膽管 癌原發(fā)灶的膽管癌細胞系FRH-0201的基礎上建立膽管癌細胞阿霉素耐藥株 FRH一0201/Adm，并研究其生物學特性，為探討惡性腫瘤細胞對化療耐藥的 機制并且體外逆轉腫瘤MDR的新方法，克服當前化學治療腫瘤中存在的這 一主要障礙奠定一個研究的基礎平臺。 方法：選擇我們建

2、立并已經(jīng)傳代的原發(fā)肝門部膽管癌細胞系(FRH－0201)，已傳至第120代，細胞生長穩(wěn)定，用2μg/ml阿霉素 (adri amycin，ADM)間歇性作用誘導法逐漸篩選出耐藥細胞，最終建立了能在1μg/ml阿霉素濃度的培養(yǎng)液中生長并傳代的膽管癌細胞阿霉素耐藥株FRH-0201/Adm。以FRH-0201為對照，通過光鏡觀察細胞的形態(tài)變化，通 過MTT繪制生長曲線觀察細胞的生長規(guī)律和倍增時間；用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測細胞的腫瘤標志物

3、CAl9-9和CAl25的變化情況；用MTT法檢測耐藥性即耐藥指數(shù)的改變；流式細胞術檢測細胞的周期分布的變化；逆轉錄PCR檢測了mdr1基因mRNA表達量。免疫組織化學抗體染色檢測細胞表面耐藥 基因(mdr1)的表達產(chǎn)物p-糖蛋白(p-glycoprotein，p-gP)表達。激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內阿霉素藥物濃度的變化以觀察癌細胞的膜蛋白的功能變化情況。 結果：與FRH-0201細胞相比較，F(xiàn)RH-0201/Adm細胞的

4、形態(tài)沒有明顯的變化，倍增時間延長約3h；酶聯(lián)免疫吸附試驗檢腫瘤標記物：耐藥株與原細胞系分別為：CA125為9.1 4u/ml，8.60u/ml；MTT法檢測耐藥性即耐藥指數(shù)，該細胞對阿霉素藥物耐藥，F(xiàn)RH-0201-Adm對阿霉素的耐藥指數(shù)是親本細胞的約8倍；流式細胞術檢測細胞的周期分布，S期細胞增多16.89％，G1期細胞減少29.33％、G2期細胞增多12.46％；逆轉錄PCR檢測，細胞的mdr1基因表達增加約10.295倍，細胞表

5、面的多藥耐藥蛋白p-gp的表達顯著增加；磁共振共聚焦顯微鏡下觀察細胞內的阿霉素濃度以熒光強度表示。然后計算平均值，親本細胞株FRH-0201和耐藥細胞株FRH-0201/ADM的熒光強度平均值分別為1764.8和305.4，相差5.2倍。 結論：FRH-0201/Adm細胞是源于原發(fā)灶的腫瘤細胞的耐藥細胞株，具有耐藥性，p-gp的過表達可能參與了細胞對阿霉素的耐藥，能夠用于膽管癌術后化療耐藥機制的探討，并可以進一步研究耐藥的逆轉