海帶多糖對(duì)自然衰老小鼠皮膚膠原蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　皮膚衰老可分為自然衰老和光老化。由機(jī)體內(nèi)無(wú)法抗拒因素（如年齡、重力、機(jī)體內(nèi)分泌及免疫功能隨機(jī)體衰老而改變）及遺傳因素引起的衰老，稱為自然衰老(Intrinsic aging);由環(huán)境因素如風(fēng)吹、紫外線、化學(xué)物質(zhì)、煙塵等外源性因素引起老化，稱為光老化(Photoaging)。海帶(Laminaria japonica)是一種重要的海洋水產(chǎn)資源。海帶既可食用又可入藥，被譽(yù)為天然的保健食物，具有悠久的食用歷史。近年來(lái)研究表明

2、，海帶具有多種生物活性，大部分與海帶中的多糖有關(guān)。海帶多糖具有抗凝血與抗血栓、降血糖、抗輻射、抗癌、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)肝臟、抗突變、抗疲勞、抗炎等多種藥理作用。在我們的前期研究中發(fā)現(xiàn)，海帶多糖(Laminarin polysaccharide，LP)對(duì)紫外線輻射引起的皮膚光老化有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與海帶多糖調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶的活性有關(guān)。本課題通過(guò)建立自然衰老小鼠模型，研究海帶多糖對(duì)自然衰老皮膚膠原蛋白含量的影響，旨在探討海帶多糖延

3、緩小鼠皮膚衰老的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.蘇木素-伊紅(Htoxylin eosin，HE)染色法測(cè)量皮膚真皮層厚度、化學(xué)比色法檢測(cè)皮膚羥脯氨酸(Hydroxyproline，Hyp)的含量。
　　2.Real-time PCR法檢測(cè)皮膚組織基質(zhì)金屬蛋白酶-1(Matrixmetalloproteinase-1，MMP-1)mRNA、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1(Tissue inhibitor of matri

4、x metalloproteinase-1,TIMP-1)mRNA的表達(dá)水平。
　　3.Western Blot檢測(cè)皮膚組織MMP-1、TIMP-1蛋白表達(dá)情況。
　　4.化學(xué)比色法檢測(cè)皮膚組織丙二醛(Malonaldehyde，MDA)、過(guò)氧化氫(Hydrogen peroxide，H2O2)的含量。
　　5.化學(xué)比色法檢測(cè)皮膚組織超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(Cata

5、lase，CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。
　　結(jié)果:
　　1.真皮厚度分析及Hyp含量檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組真皮層厚度顯著減少(P＜0.05)，Hyp含量顯著降低（P＜0.01）;與模型組比較，海帶多糖中、高劑量組及維生素E（Vitamin E，VitE）組真皮層厚度顯著增加(P＜0.05)，Hyp含量顯著升高（P＜0.05），提示海帶多糖能增加自

6、然衰老皮膚膠原蛋白的含量。
　　2.Real-time PCR的結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組皮膚組織中MMP-1 mRNA表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01），TIMP-1 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P＜0.01);與模型組比較，海帶多糖中、高劑量組及VitE組皮膚組織MMP-1 mRNA含量顯著降低(P＜0.05)，海帶多糖低、中、高劑量組及VitE組皮膚組織TIMP-1 mRNA含量顯著升高(P＜0.05)，提示海帶多糖不僅能降

7、低MMP-lmRNA的表達(dá)水平，還可以提高TIMP-1 mRNA的表達(dá)水平。
　　3.Western Blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組皮膚組織中MMP-1蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01），TIMP-1蛋白表達(dá)水平顯著降低(P＜0.01);與模型組比較，海帶多糖中、高劑量組及VitE組皮膚組織MMP-1蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），海帶多糖低、中、高劑量組及VitE組皮膚組織TIMP-1蛋白表達(dá)量顯著升高(P＜0.0

8、5)。提示海帶多糖不僅能夠降低MMP-1的蛋白表達(dá)水平，而且可以提高TIMP-1的蛋白表達(dá)水平。
　　4.化學(xué)比色法檢測(cè)皮膚組織MDA、H2O2結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組皮膚組織中MDA、H2O2含量均顯著升高(P＜0.05);與模型組比較，海帶多糖中、高劑量組及VitE組皮膚組織中MDA含量顯著下降（P＜0.05）;海帶多糖高劑量組及VitE組皮膚組織中H2O2含量顯著減少(P＜0.05)，提示海帶多糖能減少皮膚組織中MDA

9、、H2O2的水平。
　　5.化學(xué)比色法檢測(cè)皮膚組織SOD、CAT、GSH-Px結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組皮膚組織中SOD、CAT、GSH-Px活性均顯著降低(P＜0.05);與模型組比較，海帶多糖中、高劑量組及VitE組皮膚SOD、CAT、GSH-Px活性均顯著升高(P＜0.05)，提示海帶多糖能提高皮膚組織中的SOD、CAT、GSH-Px的活性。
　　結(jié)論:
　　海帶多糖能夠提高自然衰老小鼠皮膚膠原蛋白的含量，延