黨參多糖對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚抗氧化作用及基因表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察黨參多糖對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚組織氧化損傷以及基因表達(dá)譜的的影響,探討黨參多糖是否能延緩小鼠皮膚衰老及其分子生物學(xué)機(jī)制,并進(jìn)一步探求營衛(wèi)氣虛衰老理論與氧化自由基學(xué)說之間的內(nèi)在聯(lián)系。
　　方法:將2月齡昆明種雄性小鼠120只隨機(jī)分成空白對照組、衰老模型組、黨參多糖低劑量組、黨參多糖高劑量組和維生素E組;采用D-半乳糖構(gòu)建衰老小鼠模型,在造模的第11天起開始進(jìn)行藥物干預(yù);給藥32天后取材進(jìn)行指標(biāo)檢測,包括皮

2、膚一般形態(tài)學(xué)觀察,測定皮膚組織中SOD活性、ATP酶活性、MDA含量、LF含量、HYP含量,以觀察黨參多糖對D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚組織形態(tài)及抗氧化能力的影響;應(yīng)用小鼠全基因組基因芯片技術(shù)篩選出黨參多糖作用后小鼠皮膚組織中具有顯著性表達(dá)差異的基因,并分別應(yīng)用GO數(shù)據(jù)庫、NCBI數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫對具有顯著性表達(dá)差異的基因進(jìn)行功能分析和信號通路分析;應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對基因芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,檢驗(yàn)結(jié)果是否真實(shí)有效。
　　結(jié)果

3、:
　　(1)皮膚組織病理切片觀察結(jié)果:與空白對照組比較,衰老模型組小鼠皮膚組織光鏡下可見表皮變薄,皮膚附屬器及真皮膠原纖維含量明顯減少;與衰老模型組比較,黨參多糖低、高劑量組及維生素E組小鼠皮膚附屬器增加,膠原纖維含量增加且排列較致密。電鏡下可見衰老模型組小鼠成纖維細(xì)胞核異染色質(zhì)增多,胞質(zhì)很少,擴(kuò)張的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及脂褐素顆粒明顯增多,膠原纖維減少;黨參多糖高劑量組及維生素E組小鼠皮膚細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無擴(kuò)張,脂褐素顆粒減少,膠原纖維數(shù)

4、量增加;黨參多糖低劑量組小鼠皮膚細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張,但膠原纖維明顯增加。
　　(2)黨參多糖對衰老小鼠皮膚抗氧化能力相關(guān)指標(biāo)的影響:與空白對照組比較,衰老模型組小鼠皮膚組織SOD活性下降(P<0.05),ATP酶活力下降(P<0.05),MDA及LF含量顯著增高(P<0.05),HYP含量顯著減少(P<0.05);與衰老模型組比較,黨參多糖高劑量組小鼠皮膚組織 SOD活性顯著增高(P<0.05),ATP酶活性顯著增高(P<0.05

5、)、MDA及LF含量顯著減少(P<0.05),HYP含量顯著增高(P<0.05);與維生素E組比較,黨參多糖高劑量組小鼠皮膚組織SOD、ATP酶活性、MDA及HYP含量值無明顯差異(P>0.05),黨參多糖低劑量組介于維生素E組和衰老模型組之間。
　　(3)黨參多糖對衰老模型小鼠皮膚基因表達(dá)的影響:黨參多糖干預(yù)后衰老模型小鼠皮膚組織中有顯著性表達(dá)差異的基因共有118個(gè),其中85個(gè)上調(diào),33個(gè)下調(diào),主要涉及的功能包括物質(zhì)代謝、細(xì)胞凋

6、亡、免疫應(yīng)答、氧化應(yīng)激、DNA損傷、蛋白修飾、基因轉(zhuǎn)錄、皮膚形態(tài)等方面;應(yīng)用KEGG數(shù)據(jù)庫分析經(jīng)黨參多糖作用后顯著改變的信號通路,共篩選出6條活性發(fā)生顯著性改變的信號通路,其中5條上調(diào),1條下調(diào)。上調(diào)的通路中,差異顯著性位于第一位和第二位的是分別與皮膚膠原纖維形成密切相關(guān)的ECM信號通路和與皮膚形態(tài)密切相關(guān)的Focal信號通路。
　　(4)RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明所驗(yàn)證的基因與基因芯片的結(jié)果相吻合,其上調(diào)或下調(diào)的趨勢一致,說明基因

7、芯片的結(jié)果真實(shí)可靠,能準(zhǔn)確地反映各組小鼠基因表達(dá)的水平。
　　結(jié)論:
　　(1)本研究結(jié)果表明黨參多糖能通過改善D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚組織的病理形態(tài),增強(qiáng)抗氧化能力及增加膠原蛋白含量來延緩皮膚衰老。
　　(2)黨參多糖能通過調(diào)節(jié)小鼠皮膚組織中多個(gè)基因及多條信號通路的活性發(fā)揮延緩皮膚衰老的作用,揭示了黨參多糖是通過多靶點(diǎn)、多途徑來延緩小鼠皮膚衰老的。
　　(3)補(bǔ)益營衛(wèi)能夠延緩小鼠皮膚衰老,中醫(yī)營衛(wèi)氣虛衰老理