骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)自然衰老小鼠T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的：研究自然衰老小鼠與年輕小鼠脾組織中CD8+CD28+T細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)后比例的差異。進(jìn)一步研究探索:(1)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)自然衰老小鼠CD8+CD28+T細(xì)胞、CD4+CD25+T細(xì)胞的影響作用,從而證明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠T細(xì)胞衰老的調(diào)節(jié)作用。(2)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)自然衰老小鼠CD8+CD28+T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用是否具有劑量依賴性,為下一步研究機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：第一部分

2、:C57BL/6N小鼠12—14月齡和6—8周齡各五只,分別分成年老組和年輕組。用小鼠淋巴細(xì)胞分離液將這些小鼠脾細(xì)胞中的淋巴細(xì)胞分離計(jì)數(shù),每只小鼠的淋巴細(xì)胞分成兩份,在細(xì)胞培養(yǎng)箱里用含有10％特級(jí)胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng),48小時(shí)后用熒光抗體PE—anti—mouse CD8、FITC—anti—mouse CD28,PE—anti—mouse CD25、FITC—anti-mouse CD4分別標(biāo)記這些細(xì)胞,最后用流式細(xì)胞

3、儀檢測(cè)CD8+CD28+T細(xì)胞、CD4+CD25+T細(xì)胞在年老組和年輕組的比例差異。第二部分:將從賽業(yè)(廣州)公司購(gòu)買的取自6—8周小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞從第六代擴(kuò)增到第八代,胰酶消化后計(jì)數(shù)備用。首先檢測(cè)年老小鼠CD8+CD28+T細(xì)胞經(jīng)過(guò)與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)后的比例變化情況,同時(shí)研究這種改變是否有劑量依賴性,此作為實(shí)驗(yàn)一。實(shí)驗(yàn)一分為三組:隔離共培養(yǎng)組:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與淋巴細(xì)胞以1:1、1:2、2:1比例放入Transwell系統(tǒng)

4、,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞放在底下,而淋巴細(xì)胞放在小室里,每個(gè)比例的淋巴細(xì)胞取自不同的五只小鼠,加入淋巴細(xì)胞完全培養(yǎng)基共培養(yǎng)。混合共培養(yǎng)組:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與五只不同小鼠的淋巴細(xì)胞以l:1比例放入6孔板的小室內(nèi),同時(shí)加入淋巴細(xì)胞完全培養(yǎng)基共培養(yǎng)。對(duì)照組:五只不同小鼠的淋巴細(xì)胞放入培養(yǎng)皿加入淋巴細(xì)胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。48小時(shí)后加入PE-anti-mouse CD8、FITC—anti—mouse CD28抗體,上流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)衰老小鼠CD

5、4+CD25+T細(xì)胞經(jīng)過(guò)與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)后的比例變化情況,此作為實(shí)驗(yàn)二,實(shí)驗(yàn)二分為兩個(gè)組,共培養(yǎng)組:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與淋巴細(xì)胞以1:1比例放入Transwell系統(tǒng),每個(gè)比例的淋巴細(xì)胞取自不同的五只小鼠,加入淋巴細(xì)胞完全培養(yǎng)基共培養(yǎng)。對(duì)照組:五只不同小鼠的淋巴細(xì)胞放入培養(yǎng)皿加入淋巴細(xì)胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后加入PE—anti—mouse CD25、FITC—anti-mouse CD4抗體,上流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。數(shù)據(jù)用S

6、PSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,p(0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：(1)經(jīng)過(guò)淋巴細(xì)胞分離液分離,年老鼠組中淋巴細(xì)胞數(shù)量高于年輕鼠淋巴細(xì)胞數(shù)量。(2)單純培養(yǎng)48小時(shí)后T細(xì)胞CD8+CD28+的共表達(dá)率年老組低于年輕組；但T細(xì)胞的CD4+CD25+的共表達(dá)率年老組卻高于年輕組。(3)實(shí)驗(yàn)一隔離共培養(yǎng)組中的CD8+CD28+T細(xì)胞比例與對(duì)照組相比有顯著提高,并且骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提高T細(xì)胞表面CD8+CD28+的共表達(dá)具有劑量依賴性

7、。混合共培養(yǎng)組的CD8+CD28+T細(xì)胞比例與對(duì)照組相比升高,而與隔離共培養(yǎng)組相比降低。(4)實(shí)驗(yàn)二中共培養(yǎng)組的CD4+CD25+T細(xì)胞的表達(dá)率低于對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 (1)單純培養(yǎng)48小時(shí)后T細(xì)胞CD8+CD28+的共表達(dá)率年老鼠組低于年輕組；但是年老鼠組的CD4+CD25+的共表達(dá)率卻高于年輕鼠組。
　　 (2)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以使衰老T細(xì)胞變的傾向于“年輕”狀態(tài),平衡原理可能起到了