腦挫傷大鼠GFAP、ApoE、S-100、炎癥因子時(shí)序性表達(dá)及代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)擬采用大鼠顱腦挫傷模型，應(yīng)用免疫組化和酶聯(lián)免疫法，結(jié)合計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)，對(duì)腦組織膠質(zhì)細(xì)胞的陽(yáng)性標(biāo)志物GFAP的形態(tài)、數(shù)目、分布和炎性因子血清水平和蛋白含量的表達(dá)進(jìn)行研究，檢測(cè)大鼠腦挫傷后在不同時(shí)間段挫傷灶及其周?chē)鶪FAP、ApoE、S-100蛋白和炎性因子的時(shí)序性表達(dá)情況及基于1H-NMR代謝組學(xué)技術(shù)研究腦損傷血清生物標(biāo)志物。
　　方法：選取健康雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分成正常對(duì)照組（n=10）、假性損傷組（n=10

2、）和腦損傷組（n=40）。損傷組在0.5h、1d、3d、7d時(shí)相點(diǎn)，各10只。
　　1）建立大鼠局灶性腦挫傷模型，運(yùn)用光學(xué)顯微鏡觀察腦組織形態(tài)學(xué)的改變，利用免疫組織化學(xué)染色法、分子生物學(xué)技術(shù)和酶聯(lián)免疫法對(duì)三組大鼠不同時(shí)間組內(nèi)腦勻漿中的GFAP、S-100和ApoE檢測(cè)。
　　2）酶聯(lián)免疫法對(duì)三組大鼠不同時(shí)間組內(nèi)腦勻漿中的炎癥因子進(jìn)行檢測(cè)。
　　3）基于1H-NMR代謝組學(xué)方法確定腦挫傷大鼠血漿生物標(biāo)志物，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3、。
　　結(jié)果：
　　1）正常對(duì)照組及假性腦損傷組大鼠大腦皮質(zhì)淺層少數(shù)神經(jīng)元或星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)淡棕色顆粒，GFAP呈弱陽(yáng)性表達(dá)。腦挫傷大鼠0.5h組，在皮質(zhì)挫傷灶周?chē)某霈F(xiàn)黃棕色顆粒；1d～3d組上述部位的陽(yáng)性細(xì)胞逐漸增加，7d組挫傷灶及其周?chē)罅可窠?jīng)元及星型膠質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)深棕色顆粒，陽(yáng)性表達(dá)。正常對(duì)照組和假性損傷組可見(jiàn)GFAP蛋白和mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯改變；腦挫傷各亞組GFAP蛋白和mRNA均增高，隨挫傷時(shí)間延長(zhǎng)GFA

4、P蛋白和mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)；
　　2）與正常對(duì)照組比較，假性腦損傷組大鼠大腦組織TNF-α、IL-6、MMP-9勻漿含量未見(jiàn)明顯變化；腦挫傷大鼠0.5h、1d、3d、7d TNF-α、IL-6、MMP-9含量均明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3）Cr、Lac、Cho、Glu含量增高，NAA峰值下降。
　　結(jié)論：
　　1）Feeney氏自由落體撞擊法可制作穩(wěn)定的局灶性腦挫傷動(dòng)物模型。