DEHP宮內(nèi)暴露對小鼠睪丸生殖毒性研究.pdf

1、鄰苯二甲酸二（2-乙基-己基）酯（DEHP）是一種常用塑化劑，因其對自然環(huán)境和人體健康有許多不利影響而受到廣泛關(guān)注。DEHP廣泛存在于各種塑料制品中，如食品包裝、兒童玩具、醫(yī)療產(chǎn)品、建筑材料和汽車用品等。DEHP與塑料基質(zhì)之間是非共價(jià)鍵結(jié)合，經(jīng)常使用或者受熱可以溢出，進(jìn)入環(huán)境，造成環(huán)境污染。DEHP可以通過吸入、攝入、注射、皮膚接觸等途徑進(jìn)入人體，影響人類的身體健康。研究發(fā)現(xiàn)，DEHP能引起神經(jīng)毒性、免疫毒性、胚胎毒性和生殖毒性等，其中

2、生殖毒性尤為顯著。睪丸作為雄性動物生殖器官，其主要功能是產(chǎn)生精子和雄性激素，維持男性生殖功能。睪丸是DEHP生殖毒性的靶器官，研究發(fā)現(xiàn)DEHP暴露會引起隱睪及類似人類睪丸發(fā)育不全綜合征的癥狀等雄性生殖損傷。
　　為研究DEHP對F1代小鼠睪丸的生殖毒性作用，本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射途徑建立DEHP宮內(nèi)暴露引起的子代雄鼠生殖毒性模型，從組織形態(tài)、激素調(diào)節(jié)和細(xì)胞凋亡三個方面探討DEHP對睪丸的毒性作用。DEHP染毒時(shí)間為孕期第13天到孕期第

3、19天，DEHP濃度分別為62.5、125、250和375mg/kg/day，對照組注射等量橄欖油。記錄孕鼠產(chǎn)仔數(shù)量、子代小鼠雌雄比例，稱量F1代40日齡、60日齡、90日齡雄性小鼠體重，睪丸濕重，檢測F1代90日齡雄性小鼠精子畸形率。通過放射免疫分析檢測F1代40日齡、60日齡、90日齡雄性小鼠血清中T、E、LH、FSH水平。Weston blot檢測F1代小鼠睪丸中睪酮合成相關(guān)酶Star和Cyp17a1的表達(dá)情況。制作F1代小鼠睪丸

4、石蠟切片，對90日齡F1代小鼠睪丸組織石蠟切片進(jìn)行HE染色，觀察睪丸組織形態(tài)變化。TUNEL檢測觀察F1代小鼠睪丸內(nèi)細(xì)胞凋亡情況。免疫組織化學(xué)檢測雄激素結(jié)合蛋白、促凋亡蛋白P53在睪丸中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
　　①DEHP導(dǎo)致F1代40日齡雄性小鼠睪丸濕重上升，精子畸形率上升，F(xiàn)1代與F2代小鼠雌雄比例上升。睪丸組織石蠟切片HE染色發(fā)現(xiàn)睪丸曲細(xì)精管中出現(xiàn)空泡化、多核細(xì)胞、不正常細(xì)胞團(tuán)塊，睪丸中曲細(xì)精管之間的間隙變大，

5、生精細(xì)胞層缺失，生精周期紊亂等。
　?、贒EHP造成40、60和90日齡F1代雄性小鼠血清睪酮（T）水平下降，60日齡F1代雄性小鼠血清雌二醇（E）水平上升，40日齡和60日齡血清促黃體生成素（LH）水平上升，60日齡、90日齡小鼠睪丸組織中雄激素結(jié)合蛋白（ABP）濃度異常。
　?、跠EHP能誘導(dǎo)睪丸中生精細(xì)胞和支持細(xì)胞凋亡，隨劑量增加，凋亡細(xì)胞明顯增加。
　　結(jié)果表明，宮內(nèi)暴露DEHP可能通過影響胚胎發(fā)育，造成下丘腦