喜樹內(nèi)生真菌的分離及其代謝產(chǎn)物10-羥基喜樹堿的研究.pdf

1、本文以我國特有藥用植物喜樹(Camptotheca acuminate Decne)為實驗材料，對喜樹內(nèi)生真菌的組織分布及分離方法進行研究。實驗結(jié)果表明，材料的表面消毒以75％乙醇和0.1％升汞結(jié)合的方法較好。對喜樹的根部和莖部的升汞消毒時間以4～5min為宜，喜樹葉子的升汞消毒時間應(yīng)控制在2min左右。在所試條件下共計分離得到38株內(nèi)生真菌，主要分布在樹葉(39.3％)和皮部(37.1％)，根部(15.9％)和種子(7.7％)中的內(nèi)生

2、真菌數(shù)目較少，在木質(zhì)部未分離到內(nèi)生真菌。 本文對10-羥基喜樹堿的薄層層析TLC條件及高效液相色譜HPLC檢測條件進行了探討，確定了適合10-羥基喜樹堿的展開劑為氯仿/甲醇(體積比9/1)；測定10-羥基喜樹堿的HPLC條件為：色譜柱：Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相為乙腈—水(20:80)；柱溫：30℃；檢測波長：266nm；流速：0.8mL/min。2株內(nèi)生真菌A5、A9的發(fā)酵產(chǎn)物中檢

3、出10-羥基喜樹堿。 利用傳統(tǒng)分類學(xué)方法和ITS序列的測定以及系統(tǒng)發(fā)育分析對A5、A9進行分類鑒定，鑒定結(jié)果表明A5為Botryosphaeria berengeriana；A9為Diaporthe phaseolorum。 對菌株A9的發(fā)酵條件和培養(yǎng)基組成進行了初步優(yōu)化，優(yōu)化培養(yǎng)基組成為：2％葡萄糖、2.6％黃豆餅粉、0.3％磷酸二氫鉀、0.3％的七水硫酸鎂。最佳搖瓶培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基起始pH6.0，搖床轉(zhuǎn)速220r/