喜樹規(guī)范化種植（GAP）及10-羥基喜樹堿制備方法研究.pdf

1、喜樹(Camptotheca acuminata Decne)是藍(lán)果樹科(Nyssaceae)喜樹屬(Camptotheca)喬木，落葉闊葉樹，主產(chǎn)亞熱帶地區(qū)。喜樹堿是從喜樹中提取的有效的抗腫瘤活性成分，喜樹堿及其衍生物能作用于拓?fù)洚悩?gòu)酶，因此阻止細(xì)胞分裂。喜樹堿的衍生物，如伊立替康，拓?fù)涮婵?，在治療結(jié)腸癌，小細(xì)胞肺癌和白血病、乳腺癌、肺癌、頑固性結(jié)腸癌、頭頸癌和惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤等療效顯著。隨著市場對于喜樹堿原料藥的需求越來越大，喜樹堿供

2、不應(yīng)求。廣西東蘭縣地處桂北石灰?guī)r地區(qū)，是我國主要的喜樹種植區(qū)之一。為了有科學(xué)的方法指導(dǎo)喜樹的種植，我們在廣西東蘭建立了喜樹規(guī)范化種植基地，對于喜樹的種植技術(shù)，病害防治技術(shù)，以及采收加工等規(guī)范化種植過程中的關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了研究。同時(shí)嘗試用兩條不同路線合成10-羥基喜樹堿，其中一條路線得到了較高收率的10-羥基喜樹堿，用高速逆流色譜分離純化得到了高純度的10-羥基喜樹堿，具有高回收率，主要副產(chǎn)物喜樹堿可以回收再利用。 1.喜樹種植基地

3、的選擇及環(huán)境質(zhì)量評價(jià)從喜樹栽培社會歷史背景、種植地地理氣候條件、土壤以及環(huán)境質(zhì)量等多方面評價(jià)與選定種植地，避免隨意引種栽培。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，廣西東蘭是喜樹傳統(tǒng)種植區(qū)之一，該地區(qū)的氣候條件和土壤都適宜喜樹的生長。對種植地的大氣、土壤和灌溉水質(zhì)進(jìn)行了檢測，其大氣、土壤和灌溉水質(zhì)量均符合《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。因此，喜樹規(guī)范化種植地設(shè)于遠(yuǎn)離居民生活區(qū)、工業(yè)區(qū)和交通要道的廣西東蘭縣蘭木鄉(xiāng)納核村。 2.喜樹種植技術(shù)與病蟲害防治對

4、喜樹育苗技術(shù)、種植技術(shù)、病害防治等規(guī)范化種植過程中的關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了總結(jié)，以及對石灰?guī)r山地種植的喜樹的生長性能進(jìn)行了測定。首先，對喜樹育苗技術(shù)進(jìn)行了探索，包括苗床消毒，種子處理，播種，苗期管理等環(huán)節(jié)進(jìn)行了詳細(xì)描述。種植技術(shù)中的施肥，移植和田間管理環(huán)節(jié)做了總結(jié)。褐斑病是石灰?guī)r山區(qū)喜樹最嚴(yán)重的病害，針對其病因及發(fā)病規(guī)律作出了喜樹褐斑病的綜合防治技術(shù)，農(nóng)業(yè)防治減少病原，合理施肥增強(qiáng)樹勢，在高溫多雨季節(jié)用波爾多液進(jìn)行化學(xué)防治，發(fā)病初期用50﹪代森

5、錳鋅或多抗霉素(多氧霉素)，世高水分散粒劑，葉斑清乳進(jìn)行防治，連續(xù)防治2～3次。 3.喜樹堿分析方法研究針對喜樹中的有效化學(xué)成分喜樹堿，建立了高效液相色譜法測定喜樹中不同部位喜樹堿含量的方法。本研究可用于不同成熟度的喜樹果實(shí)，不同產(chǎn)地采集的喜樹果實(shí)，不同生長期的喜樹葉，不同土壤條件下種植的喜樹的喜樹葉，喜樹不同組織部位，不同干燥方式的喜樹果實(shí)，儲存時(shí)間不同的喜樹樣品中的喜樹堿的含量分析。用超聲提取法制備供試品，并且優(yōu)化了供試品的

6、制備條件。本方法對于喜樹的基礎(chǔ)研究，以及喜樹的開發(fā)利用，均具有十分重要的作用。 4.各因素影響喜樹堿含量的研究為了確定作為喜樹堿生產(chǎn)原料的喜樹組織部位，最佳的采收期，以及為喜樹原料的最佳干燥儲存方式提供正確的指導(dǎo)。分析討論了各因素對喜樹堿含量變化的影響：喜樹果實(shí)中的喜樹堿隨著果實(shí)成熟度的增加而逐漸增加；廣西東蘭的喜樹果實(shí)和湖南通道的喜樹果實(shí)喜樹堿得含量差別不大，但是同屬同一產(chǎn)地的華南植物園和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)的喜樹果實(shí)中喜樹堿含量相差

7、1倍；喜樹葉片中的喜樹堿含量三、四月份較高，然后變化逐漸趨于平緩；在廣西東蘭處于不同立地條件生長的喜樹葉中喜樹堿的含量無明顯差異；喜樹嫩葉比老葉中喜樹堿含量高，嫩枝條比老枝條中的喜樹堿含量高，花也是一個(gè)喜樹堿含量較高的部位，僅次于果實(shí)中的喜樹堿含量；常溫真空干燥的喜樹果實(shí)中喜樹堿的含量最高，烘干和曬干的喜樹果實(shí)中喜樹堿含量差別不大，陰干的稍低；喜樹果實(shí)以及喜樹葉在干燥條件下儲存，其中的喜樹堿含量無變化。本研究為科學(xué)的制定喜樹規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)操

8、作規(guī)程(SOP)以及喜樹資源的開發(fā)利用提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。 5.10-羥基喜樹堿的合成10-羥基喜樹堿是在國內(nèi)上市的抗腫瘤藥物，也是多種已在美國上市的喜樹堿類抗腫瘤藥物的原料藥，本文嘗試了用兩條不同路線合成10-羥基喜樹堿。其中一條路線通過氧化喜樹堿得到喜樹堿氮氧化物，再通過光重排反應(yīng)得到10-羥基喜樹堿此路線，產(chǎn)率高，得到的10-羥基喜樹堿副產(chǎn)物少，且主要副產(chǎn)物是喜樹堿，可以回收利用。另一條路線第一步反應(yīng)有較好的結(jié)果，但是