羥基喜樹(shù)堿膠束的制備及其抗腫瘤作用的初步研究.pdf

1、本文對(duì)羥基喜樹(shù)堿膠束的制備及其抗腫瘤作用進(jìn)行了研究。本研究分為三個(gè)部分;
　　第一部分：HCPT含量測(cè)定方法學(xué)的建立。
　　目的：建立羥基喜樹(shù)堿（HCPT）體外含量測(cè)定的方法與標(biāo)準(zhǔn)。
　　方法：配制HCPT標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用紫外分光光度計(jì)于200～400nm處進(jìn)行光譜掃描，確定吸收波長(zhǎng)；同時(shí)配制一定濃度的聚乙二醇接枝聚天冬氨酸（PEG-g-PASP）載體及聚乙二醇接枝聚天冬氨酸（羥基喜樹(shù)堿）(PEG-g-PASP(HCPT

2、))納米膠束的甲醇溶液，用同樣方法進(jìn)行光譜掃描。配制一系列濃度的HCPT甲醇溶液，在確定波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行日內(nèi)、日間精密度及回收率考察。
　　結(jié)果：經(jīng)紫外掃描確定HCPT吸收波長(zhǎng)為384nm，且載體在此波長(zhǎng)處無(wú)吸收，對(duì)PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束中HCPT的測(cè)定無(wú)干擾。HCPT藥物濃度在（2.0～7.0）ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，計(jì)算回歸方程為:A=0.0922C+0.0046(R2=0.9

3、995)，日內(nèi)、日間精密度RSD均小于5％，平均回收率為99.7%。
　　結(jié)論：紫外分光光度法測(cè)定PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束包封率及載藥量符合方法學(xué)要求，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、可行。
　　第二部分：PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束的制備及表征。
　　目的：制備PEG-g-PASP納米載藥膠束，并包載難溶性抗癌藥物HCPT，從而實(shí)現(xiàn)抗癌藥物的緩控釋放及腫瘤靶向性，同時(shí)增加藥物溶解性，延長(zhǎng)半衰期。
　　

4、方法：采用自制甲氧基單末端氨基聚乙二醇（PEG-NH2）與PSI反應(yīng)，堿性條件下水解得到PEG-g-PASP納米載藥膠束，最后采用透析法制備PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束。通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定膠束的包封率及載藥量，并以此為評(píng)價(jià)指標(biāo)選擇最優(yōu)處方。采用激光粒度分析儀測(cè)定最優(yōu)處方下PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束的粒徑及其分布，透射電鏡下觀察膠束的形貌及粒徑，同時(shí)采用芘熒光探針?lè)y(cè)定該膠束的臨界膠束濃度。
　　結(jié)果：

5、成功制備PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束，其包封率及載藥量隨藥物的增加先增加后減小，藥物與聚合物的最佳質(zhì)量比為1.5:15，按照最優(yōu)處方制得的PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束成形良好，呈圓球型，結(jié)構(gòu)規(guī)整，大小均勻，無(wú)粘連，平均粒徑為55.26nm，包封率為18.92%，載藥量為1.89%，臨界膠束濃度為6.76×10-3 mg/ml。
　　結(jié)論：以自制PEG-g-PASP為載體材料,HCPT為模型藥物,通過(guò)透析法制

6、備了PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束,并對(duì)其投料比進(jìn)行考察，選出了最優(yōu)處方。激光粒度儀和透射電鏡測(cè)得的最優(yōu)處方下的膠束粒徑及形貌均較為理想，熒光分光光度計(jì)測(cè)得的臨界膠束濃度較小，具有較好的熱力學(xué)穩(wěn)定性。
　　第三部分：PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束對(duì)RSCC-1細(xì)胞體外抑制實(shí)驗(yàn)。
　　目的：探討PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束對(duì)RSCC-1細(xì)胞體外抑制作用。
　　方法：復(fù)蘇凍存的兔舌癌RSCC

7、-1細(xì)胞，培養(yǎng)并傳代至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的兔舌癌RSCC-1細(xì)胞與PBS、不同濃度的PEG-g-PASP空白膠束、HCPT和PEG-g-PASP(HCPT)共同培養(yǎng)不同時(shí)間后， MTT法檢測(cè)體外細(xì)胞毒作用，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。
　　結(jié)果：MTT檢測(cè)結(jié)果顯示HCPT具有明顯細(xì)胞毒作用，作用強(qiáng)度與藥物濃度及作用時(shí)間成正相關(guān)；PEG-g-PASP空白膠束對(duì)RSCC-1細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒作用(P＞0.05)；PEG-g-PASP(HCPT