熒光假單胞菌的分離及蝎毒基因的原核表達.pdf

1、上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文熒光假單胞菌的分離及蝎毒基因的原核表達姓名：陸文蔚申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：肖明20050501上海師范大學(xué)碩士 學(xué)位論文 熒光假單胞菌的分離及蝎毒基因的原 核表 達I s o l a t i o n o f P s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n s a n d p r o k a r y o t i c e x p r e s s i o

2、 n o fAn d r o c t o n u s a u s t r a l i s h e c t o r i n s o e t t o x i nAb s t r a c tP s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n s i s p l a n t r h i z o s p h e r e b a c t e r i u m o r p l a n t - w

3、i t h i ne n d o b a c t e r i u m , w h i c h h a s t h e f u n c t i o n s o f b o t h p r o m o t i n g p l a n t r o o t g r o w t h a n ds e r v i n g a s b i o c o n t r o l a g e n t . A n d r o c t

4、o n u s a u s t r a l i s h e c t o r i n s e c t t o x i n 1 ( A a H I T l )i s i n s e c t - s p e c i f i c s c o r p i o n n e u r o t o x i n , u n i n j u r i o u s t o m a m m a l i a n , a n d a l l

5、 o w s o f n e wi n s e c t i c i d e . S o i l s a m p l e s w e r e t a k e n f r o m s u b u r b o f S h a n g h a i C i t y , f r o m w h i c hr h i z o s p h e r e b a c t e r i a d e p r e s s i n g

6、 c r o p p a t h o g e n i c f u n g u s w e r e i s o l a t e d t h r o u g h K Bm e d i a n a n d m e a s u r e o f a n t a g o n i s t i c a b i l i t y . T h e s h a p e o f t h e r h i z o s p h e r

7、e b a c t e r i aw a s o b s e r v e d w i t h e l e c t r o n m i c r o s c o p e a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e s e b a c t e r i a w a sp e r f o r m e d t h r o u g h b i o c h e m i s t

8、 r y m e t h o d s . T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e r h i z o s p h e r eb a c t e r i a w e r e P s e u d o m o n a s 刀 u o r e s c e n s . T h e A a H I T l - c o d i n g g e n e s e q u e n

9、 c ed e s i g n e d a c c o r d i n g t o a m i n o a c i d s e q u e n c e o f A a H I T l a n d p r e f e r e n c e認 aso fp r o k a r y o t i c m i c r o b e f o r c o d o n . T h i s g e n e w a s s y

10、n t h e s i z e d t h r o u g h P C R m e t h o d .T h e s y n t h e s i z e d g e n e w a s s e q u e n c e d b y d i d e o x y n u c l e o t i d e s e q u e n c i n g a n d n oc h a n g e s w e r e f o u

11、n d . T h e n , t h e A a H I T l - c o d i n g s e q u e n c e w a s l i n k e d w i t h p E T 3 2 a ,r e s u l t i n g i n t h e r e c o m b i n e d p l a m i d , p E T 3 2 a / A a H I T l , w a s t e n

12、t a t i v e l y e x p r e s s e d i nE . c o l i . S e c o n d l y , t h e A a H I T l - c o d i n g s e q u e n c e w a s c l o n e d i n t o p S U P 1 0 6 , am u l t i h o s t e x p r e s s i o n v e c t o

13、 r . T h e r e s u l t i n g v e c t o r w a s i n t r o d u c e d i n t o t h eP s e u d o m o n a s 刀 u o r e s c e n s w i t h t h e a c t i v i t y f o r d e p r e s s i n g c r o p p a t h o g e n i c

14、 f u n g u s .T h e e x p r e s s i o n w a s i n d u c e d w i t h I P T G . S D S - P A G Ep r o d u c t s h o w e d t h a t t h e A a H I T l w a s s u c c e s s f u l l y e x p r e s s e do f t h e e x

15、 p r e s s i o ni n P s e u d o mo n a sf l u o r e s c e n s , i n d i c a t i n g t h a t a n e n g i n e e r i n g P s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n s , w h i c h m i g h td e p r e s s c r o p p a

16、t h o g e n i c f u n g u s a n d p r o d u c e i n s e c t - s p e c i f i c s c o r p i o n n e u r o t o x i n ,w a s e s t a b l i s h e d . T h i s i s t h e b a s i s f o r d e v e l o p m e n t o f p o l y f

17、 u n c t i o n a le n v i r o n m e n t - f r i e n d l y b i o p e s t i c i d e .K e y w o r d s :P s e u d o m o n a s 刀 u o r e s c e n s ; s c o r p i o n i n s e c t t o x i n ; p r o k a r y o t i c e x p r e s