熒光假單胞菌毒蛋白的分離純化與松材線蟲的無異培養(yǎng).pdf

1、該研究對(duì)松材線蟲攜帶的致病細(xì)菌熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)GcM5-1A菌株產(chǎn)生的毒素蛋白進(jìn)行了分離、純化及對(duì)分離后蛋白組分的生物活性進(jìn)行了測(cè)定;同時(shí),對(duì)松材線蟲的無異培養(yǎng)進(jìn)行了研究,主要的研究結(jié)果如下:1.熒光假單胞菌GcM5-1A毒素原液經(jīng)(NH<,4>)<,2>SO<,4>分級(jí)鹽析及生物活性測(cè)定后得到毒性最強(qiáng)的組分;該組分先后依次經(jīng)葡萄糖Sephadex G-100凝膠層析柱、DEAESephad

2、exA-50陰離子交換柱及SP Sephadex C-50陽離子柱分離及對(duì)分離后各組分生物活性測(cè)定,得到其中毒性最強(qiáng)組分的純化蛋白;對(duì)純化蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳,得該純化蛋白的大致分子量為45000.2.黑松愈傷組織對(duì)無菌松材線蟲產(chǎn)卵量的影響的研究結(jié)果表明:無論是經(jīng)冷凍處理失活的黑松愈傷組織還是活黑松愈傷組織,兩者都能明顯地促進(jìn)松材線蟲的產(chǎn)卵;黑松愈傷組織是否失活對(duì)松材線蟲產(chǎn)卵量沒有顯著影響.3.熒光假單胞菌GcM5-1A菌株對(duì)松

3、材線蟲產(chǎn)卵量的影響的研究結(jié)果表明:用經(jīng)三氯甲烷處理后的死熒光假單胞菌GcM5-1A與活熒光假單胞菌GcM5-1A都對(duì)松材線蟲的產(chǎn)卵量有顯著的促進(jìn)作用;熒光假單胞菌GcM5-1A是否死亡對(duì)松材線蟲的產(chǎn)卵量沒有顯著影響.4.研究表明:用死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織培養(yǎng)的無菌松材線蟲的產(chǎn)卵量與用活黑松愈傷組織培養(yǎng)的野生松材線蟲的產(chǎn)卵量之間沒有差異,而用前者培養(yǎng)的無菌松材線蟲的產(chǎn)卵量卻顯著多于單獨(dú)用死黑松愈傷組織培養(yǎng)的無菌松材線蟲的產(chǎn)卵量,說

4、明用死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織比單獨(dú)用黑松愈傷組織培養(yǎng)無菌松材線蟲能促進(jìn)松材線蟲的繁殖.5.對(duì)分別用活黑松愈傷組織、死熒光假單胞菌、活熒光假單胞菌以及死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織四種介質(zhì)培養(yǎng)的第一代和第二代無菌松材線蟲雌雄成蟲體長(zhǎng)、體直徑及體積進(jìn)行觀察測(cè)定,結(jié)果表明,無論是第一代還是第二代,用死熒光假單胞菌加死愈傷組織培養(yǎng)的無菌松材線蟲雌雄成蟲的體長(zhǎng)、體直徑和體積都明顯大于用其它三種介質(zhì)培養(yǎng)的松材線蟲雌雄成蟲的體長(zhǎng)、體直徑和體積,

5、說明與其它三種介質(zhì)相比,死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織能明顯促進(jìn)無菌松材線蟲的生長(zhǎng)發(fā)育.綜上所述,該研究首次對(duì)松材線蟲攜帶的致病細(xì)菌熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescents)GcM5-1A菌株產(chǎn)生的毒素蛋白進(jìn)行分離、純化及生物活性測(cè)定,得到了毒性最強(qiáng)的純化蛋白;經(jīng)測(cè)定其分子量約為45000.該研究首次報(bào)道了用死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織培養(yǎng)無菌松材線蟲的新方法;該方法比單獨(dú)用黑松愈傷組織培養(yǎng)無菌松材線蟲在線蟲產(chǎn)卵量