銅綠假單胞菌的耐藥情況及基因同源性分析.pdf

1、目的:1、觀察廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年12月～2014年4月檢驗(yàn)科細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室從住院患者各類標(biāo)本中分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌菌株的來(lái)源分布及耐藥情況。2、了解該院銅綠假單胞菌菌株之間的親緣關(guān)系。3、對(duì)比銅綠假單胞菌的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（Random amplifiedpolymorphic DNA，RAPD）指紋圖譜，判斷是否存在局部爆發(fā)流行。4、了解銅綠假單胞菌在長(zhǎng)期持續(xù)感染過(guò)程中的RAPD指紋圖譜變化情況。
　　方法:

2、1、收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年12月～2014年4月檢驗(yàn)科細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室從本院住院患者痰液、肺泡灌洗液、血液、尿液、創(chuàng)面分泌物等各類標(biāo)本中分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌菌株及其相關(guān)信息。用VITEK-2全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏分型儀或ATB expression半自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀對(duì)分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌菌株進(jìn)行培養(yǎng)鑒定和藥敏分析。細(xì)菌培養(yǎng)鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)遵照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的要求進(jìn)行，同時(shí)參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（Clinica

3、l and Laboratory Standards Institute，CLSI）2012年制定的標(biāo)準(zhǔn)。分析非重復(fù)銅綠假單胞菌的流行病學(xué)特征及其藥敏情況。2、選擇感染銅綠假單胞菌時(shí)間大于30天的患者，從他們的痰液、肺泡灌洗液、血液、尿液等標(biāo)本中分離的銅綠假單胞菌菌株作為本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)菌株。用煮沸法提取細(xì)菌基因組DNA，采用RAPD基因分型技術(shù)獲得RAPD指紋圖譜，并進(jìn)行同源性聚類分析，通過(guò)相似性系數(shù)了解該院銅綠假單胞菌菌株之間的親緣關(guān)系

4、;對(duì)比銅綠假單胞菌的RAPD指紋圖譜，判斷銅綠假單胞菌局部爆發(fā)流行的存在，以及長(zhǎng)期持續(xù)感染銅綠假單胞菌的過(guò)程中，其指紋圖譜是否會(huì)發(fā)生改變。
　　結(jié)果:1、共收集銅綠假單胞菌293株。其中剔除同一患者同一部位重復(fù)分離菌株后的非重復(fù)銅綠假單胞菌為175株。從標(biāo)本來(lái)源來(lái)看，非重復(fù)銅綠假單胞菌主要分離于患者的呼吸道標(biāo)本痰及肺泡灌洗液，占52％(91/175)，其余依次為創(chuàng)面分泌物占18.9％(33/175)、尿液占6.9％(12/175)

5、、血液占6.3％(11/175)、腹腔引流液占5.7％(10/175)，其余標(biāo)本來(lái)自留置導(dǎo)管、咽拭子、組織標(biāo)本等。從科室分布來(lái)看，非重復(fù)銅綠假單胞菌主要分離于來(lái)自重癥監(jiān)護(hù)病房的患者，占25.7％(45/175)，其次為燒傷整形外科17.7％(31/175)、中醫(yī)科占13.1％(23/175)、呼吸內(nèi)科占8.6％(15/175)和兒科5.1％(9/175)，其余標(biāo)本來(lái)自其他臨床科室。分析其藥敏情況，發(fā)現(xiàn)非重復(fù)銅綠假單胞菌對(duì)氨曲南、環(huán)丙沙星

6、、左氧氟沙星、妥布霉素及慶大霉素的耐藥率較高，均＞30％。2、在收集的293株銅綠假單胞菌中，有117株來(lái)自感染銅綠假單胞菌持續(xù)時(shí)間大于30天的患者;這117株銅綠假單胞菌共擴(kuò)增出19種不同的基因型條帶，分別為A～S型，分型率100％。重癥監(jiān)護(hù)病房及燒傷整形外科各發(fā)生一起在不同患者之間檢出相同RAPD型別銅綠假單胞菌菌株的情況，其余患者RAPD型別各不相同。有4例長(zhǎng)期持續(xù)感染銅綠假單胞菌的患者，從其痰液、肺泡灌洗液、創(chuàng)面分泌物、血液、尿

7、液等標(biāo)本中分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌RAPD指紋圖譜發(fā)生改變，其余19例患者痰液、肺泡灌洗液等送檢標(biāo)本中分離出的銅綠假單胞菌RAPD指紋圖譜未發(fā)生改變。
　　結(jié)論:1、銅綠假單胞菌感染主要發(fā)生在重癥監(jiān)護(hù)病房、燒傷整形外科和中醫(yī)科;它們對(duì)多種抗生素呈不同程度耐藥，其中對(duì)氨曲南、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素及慶大霉素的耐藥率均＞30％，而對(duì)多粘菌素B的耐藥率為0，敏感率100％。
　　2.銅綠假單胞菌存在基因多態(tài)性，部分型別之間