聚乙二醇化重組人生長激素的制備、純化、理化性質(zhì)以及生物活性研究.pdf

1、　　目的：研究單甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD，20KD)修飾重組人生長激素(rhGH)的最適反應(yīng)條件以及修飾產(chǎn)物的純化方法；并以目標(biāo)產(chǎn)物——單聚PEG-rhGH為研究對象，對其相對分子量、純度、等電點(diǎn)、修飾位點(diǎn)、二級結(jié)構(gòu)、分子構(gòu)象、體外受體親和力以及體內(nèi)生物學(xué)活性進(jìn)行了研究。方法：用SDS-PAGE分析不同反應(yīng)條件對修飾反應(yīng)產(chǎn)物的影響；用離子交換及分子篩進(jìn)行分離純化；通過分子篩高效液相(SizeExclusionHPLC)、毛細(xì)

2、管等電聚焦(CIEF)、圓二色譜(CD)、質(zhì)譜、以及熒光光譜等方法對單聚PEG-rhGH的純度、等電點(diǎn)、二級結(jié)構(gòu)、相對分子量、修飾位點(diǎn)以及分子構(gòu)象進(jìn)行了研究；采用妊娠兔肝細(xì)胞膜放射受體分析法(RRA)檢測單聚PEG-rhGH的體外受體親和力；利用未成年去垂體大鼠體重增加法檢測單聚PEG-rhGH的體內(nèi)生物活性。結(jié)論：確立了單甲氧基聚乙二醇丙醛修飾重組人生長激素的最適反應(yīng)條件以及修飾產(chǎn)物的純化方法。并對單聚PEG-rhGH的相對分子量、純