MARVELD1參與DNA損傷響應(yīng)的功能和機(jī)制研究.pdf

1、MARVELD1是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,在多種腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)。前期研究表明細(xì)胞經(jīng)UV、γ射線和多種核酸損傷藥物等處理后,MARVELD1均呈現(xiàn)表達(dá)上調(diào),并且,MARVELD1可以通過(guò)調(diào)控p53和p16而抑制細(xì)胞增殖。但是關(guān)于MARVELD1在UV誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)中的作用和分子機(jī)制仍知之甚少,因此本課題對(duì)MARVELD1在UV誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)中的功能和分子機(jī)制進(jìn)行了初步的探討。
　　通過(guò)免疫熒光和免疫印跡技術(shù),研究發(fā)現(xiàn)U

2、V能夠誘導(dǎo)MARVELD1表達(dá),并且具有時(shí)間和劑量雙重依賴性。彗星電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MARVELD1能夠促進(jìn)H2O2誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)。同時(shí),克隆存活實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MARVELD1表達(dá)沉默后細(xì)胞對(duì)UV的敏感性增加。流式分析結(jié)果顯示UV誘導(dǎo)的細(xì)胞周期G1/S期阻滯不依賴MARVELD1,但是MARVELD1可以促進(jìn)細(xì)胞從UV誘導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯中恢復(fù)。通過(guò)免疫熒光技術(shù),我們發(fā)現(xiàn)MARVELD1與XPC以及ssDNA具有UV依賴性共定位。同時(shí),

3、MARVELD1表達(dá)沉默后細(xì)胞內(nèi)包括γH2AX、p53、XPC和PCNA在內(nèi)的多個(gè)NER修復(fù)因子的蛋白水平下調(diào),但是對(duì)BER修復(fù)通路中的蛋白XRCC1沒(méi)有明顯影響。
　　免疫印跡結(jié)果顯示H2O2和UV可以誘導(dǎo)MARVELD1發(fā)生共價(jià)修飾。免疫熒光、GST-pulldown和免疫共沉淀結(jié)果共同證實(shí)了MARVELD1與SENP3具有相互作用,并且受到UV的調(diào)控。同時(shí),我們MARVELD1參與了UV誘導(dǎo)的組蛋白H4K20的甲基化調(diào)控,U

4、V會(huì)導(dǎo)致H4K20me1總蛋白水平下調(diào),H4K20me3總蛋白水平上調(diào),但是對(duì)H4K20me2總蛋白水平?jīng)]有影響。MARVELD1表達(dá)沉默會(huì)上調(diào)H4K20me1總蛋白水平而降低H4K20me3總蛋白水平,對(duì)H4K20me2總蛋白水平?jīng)]有影響。免疫共沉淀結(jié)果顯示MARVELD1與H4K20me1在正常情況下具有相互作用,而在UV照射后這種相互作用消失。
　　綜上所述,研究證實(shí)MARVELD1通過(guò)募集在DNA損傷位點(diǎn),并通過(guò)調(diào)控γH2