耐輻射球菌DNA損傷響應(yīng)基因ddrI的研究.pdf

1、耐輻射球菌(Deinococcus radiodurans)是世界上最耐輻射的物種之一，對(duì)各種DNA損傷介質(zhì)具有超強(qiáng)的抗性，已成為研究基因組完整性和穩(wěn)定性的一種理想模式生物。本實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果顯示，一個(gè)被注釋為CRP/FNR家族的基因ddrⅠ(基因編號(hào)為dr0997)，在DNA受損時(shí)被顯著誘導(dǎo)表達(dá)，可能貢獻(xiàn)于耐輻射球菌的極端抗性。因此，我們重點(diǎn)圍繞該基因進(jìn)行了研究。
　　 1.分別構(gòu)建了dr0997及其同源基因dr1646的基因

2、缺失突變株，并發(fā)現(xiàn)突變株相對(duì)于野生株，生長情況出現(xiàn)了明顯的延滯。
　　 2.分析了△DR0997突變株對(duì)DNA損傷因子的抗性。結(jié)果表明：dr0997和dr1646對(duì)UV和氧化損傷抗性的貢獻(xiàn)都不大。而△DR0997突變株對(duì)γ-射線輻照處理很敏感，表明該基因可能與電離輻射造成的雙鏈斷裂修復(fù)有關(guān)。
　　 3.用DNA微陣列技術(shù)分析了突變株相對(duì)于野生株的轉(zhuǎn)錄譜變化。本研究覆蓋了3033個(gè)基因，占整個(gè)基因組的95.26％。DR09

3、97的缺失導(dǎo)致28個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào)，另外79個(gè)基因明顯下調(diào)，這些基因很多涉及NADPH、乙酰輔酶A合成酶等的轉(zhuǎn)錄合成，表明dr0997可能參與調(diào)控了相關(guān)途徑。
　　 4.表達(dá)并純化了DR0997重組蛋白。通過測(cè)序，我們證實(shí)對(duì)該基因在Genebank的ORF是錯(cuò)誤的，其實(shí)際長度為612 bp，我們以新序列為標(biāo)準(zhǔn)克隆了dr0997基因，并最終成功在體外表達(dá)并純化了DR0997重組蛋白。
　　 綜上所述，耐輻射球菌的D