PSMA適配子-穿膜肽-siRNA靶向高效遞送系統(tǒng)的建立及其功能驗證.pdf

1、目的：
　　盡管RNA干擾技術(shù)已經(jīng)被開發(fā)為前列腺癌治療的新方法，但是體內(nèi)應(yīng)用時靶向特異地將治療性siRNA遞送至目標腫瘤組織仍然存在很大挑戰(zhàn)。迄今為止關(guān)于siRNA遞送的研究關(guān)注于改善遞送靶向性和將siRNA跨膜遞送至胞內(nèi)，但是兩者是兩個相對獨立的研究方向[39]。聯(lián)合應(yīng)用特異遞送以及跨膜遞送策略無疑較單一策略具有優(yōu)勢，但聯(lián)合策略目前尚未見報道。此項研究的目的是通過遞送策略的聯(lián)合應(yīng)用構(gòu)建PMSA適配子-穿膜肽-siRNA靶向高效遞

2、送系統(tǒng)A10-STD-(sur-siRNA)，該遞送復(fù)合體系旨在同時解決siRNA遞送的特異性和高效性兩個問題。
　　方法：
　　治療性siRNA分子（sur-siRNA）針對survivin基因降低其表達發(fā)揮抑瘤作用。為改善遞送特異性，選擇適配子A10介導(dǎo)sur-siRNA靶向遞送；為改善遞送高效性，選擇穿膜肽TAT-DRBD介導(dǎo)sur-siRNA跨膜；為了偶聯(lián)兩種策略，選擇鏈霉親和素SA-生物素系統(tǒng)進行偶聯(lián)。首先用原核表

3、達體系表達融合蛋白STD，發(fā)揮蛋白骨架功能。STD由鏈霉親和素SA（S）、穿膜肽TAT（T）和雙鏈RNA結(jié)合蛋白DRBD（D）三部分組成。然后STD通過SA與生物素標記的抗前列腺癌特異性膜抗原（PSMA）的適配子A10結(jié)合，以及通過DRBD與抗survivin基因的siRNA（sur-siRNA）結(jié)合。遞送復(fù)合體建立后通過與無轉(zhuǎn)染策略以及單一遞送策略對照組進行比較，進一步在遞送的靶向性、高效性以及抑瘤效能方面進行功能驗證。
　　結(jié)

4、果：
　　利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)（pET44b質(zhì)粒/Rosetta-gami菌株）成功表達了SA-3TAT-DRBD（STD）融合蛋白。經(jīng)驗證通過兩步低溫條件下STD融合蛋白與A10及siRNA共孵育遞送復(fù)合體A10-STD-(sur-siRNA)組裝完成。經(jīng)驗證該遞送復(fù)合體系能特異性靶向PSMA陽性的前列腺癌細胞或者組織，并能將有效地將sur-siRNA遞送至LNCaP細胞系的胞質(zhì)中。與其他常用siRNA遞送試劑脂質(zhì)體2000

5、以及單純靶向策略A10-(sur-siRNA)嵌合體比較，分別提高19.2％及59.9%的遞送效率以及16.8%及26.1%的促細胞凋亡率。體內(nèi)實驗證明經(jīng)尾靜脈注射sur-siRNA，遞送復(fù)合體組較其他兩組能明顯抑制腫瘤組織生長（p <0.001）。
　　結(jié)論：
　　治療性siRNA的靶向高效遞送系統(tǒng)A10-STD-(sur-siRNA)能特異性及高效性地將治療性 sur-siRNA 遞送至靶向腫瘤細胞，在體內(nèi)應(yīng)用時能有效抑