中國孤雌生殖鹵蟲胚胎發(fā)育相關(guān)基因的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鹵蟲(Artemia)屬于甲殼綱(Crustasea)，鰓足亞綱(Branchiopoda)，無甲目(Anostacea)，鹵蟲科(Artemidae)，鹵蟲屬(Artemia)，通常分布于內(nèi)陸鹽湖和海岸鹽田中。本研究采用mRNA差異顯示方法分離中國孤雌生殖鹵蟲早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因。以發(fā)育0h、4h、8h、12h、16h和10d的中國孤雌生殖鹵蟲的總RNA為模板，用Oligod(T)13M(M分別為A、C、G)3種錨定引物和26種隨機引

2、物組合進(jìn)行DDRT-PCR，經(jīng)6％非變性PAGE凝膠電泳后，用硝酸銀染色顯示差異條帶，共得到286條胚胎發(fā)育相關(guān)差異DNA片段，片段長度250-2000bp左右。對其中24條差異片段進(jìn)行克隆測序，測序結(jié)果通過GenBank/EMBL/DDBJ/進(jìn)行BLAST檢索分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Seq1、Seq2片斷與已知基因有較高的同源性，其余片段與已知基因同源性較低。其中Seq1序列與編碼羅非魚的肌酸激酶基因有較高的同源性，517個堿基中有482個堿基

3、是相同的，同源性達(dá)到了92％，Score=747，E=0。用BLASTX進(jìn)一步比對表明：Seq1序列與羅非魚的肌酸激酶有很高的同源性，部分序列同源性達(dá)到了88％，Score=300，E=3e-80。分離膠顯示該基因在孤雌生殖鹵蟲胚胎發(fā)育至16h、10d時表達(dá)量增多。RT-PCR和測序結(jié)果進(jìn)一步證明在鹵蟲胚胎發(fā)育至16h和10d時Seq1基因確實存在。Seq1為編碼中國孤雌生殖鹵蟲肌酸激酶基因的一部分，該基因與中國孤雌生殖鹵蟲早期胚胎發(fā)育

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