鴨早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因消減文庫(kù)的構(gòu)建與分析.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以浙江省優(yōu)質(zhì)蛋鴨品種縉云麻鴨的鴨胚為實(shí)驗(yàn)材料,以DSN酶介導(dǎo)的均一化消減雜交為實(shí)驗(yàn)手段,來(lái)構(gòu)建鴨早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因消減文庫(kù),以期找到與鴨胚胎發(fā)育相關(guān)的新基因,探索胚胎發(fā)育基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制。
　　 本實(shí)驗(yàn)共構(gòu)建了兩個(gè)鴨早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因的消減雜交文庫(kù)。第一個(gè)文庫(kù)以上一枚蛋產(chǎn)出后的第6小時(shí)和第20小時(shí)鴨輸卵管中的蛋為實(shí)驗(yàn)材料(其中6小時(shí)作為驅(qū)動(dòng)組,20小時(shí)作為實(shí)驗(yàn)組)進(jìn)行DSN介導(dǎo)的消減雜交,最終得到的消減產(chǎn)物與pU

2、Cm-T載體進(jìn)行連接,通過(guò)藍(lán)白斑篩選,隨機(jī)挑選其中的216個(gè)陽(yáng)性克隆,最后通過(guò)菌液PCR挑選大于750bp的片段進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果在Vecscreen上去除載體序列,用Staden Package去除冗余序列,最終共得到了54條獨(dú)立的差異表達(dá)基因,經(jīng)BLAST比對(duì),其中有44條基因具有同源基因,另外10條無(wú)同源基因。通過(guò)GO注釋發(fā)現(xiàn),這些基因在代謝、建立細(xì)胞定位、生物調(diào)節(jié)等各種生物途徑中都發(fā)揮著作用,而一些基因可參與兩種或兩種以上的生物

3、途徑。進(jìn)一步查閱資料對(duì)相關(guān)的同源基因進(jìn)行研究,其中一些基因在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等方面發(fā)揮著作用,另一些則尚未有相關(guān)功能的研究報(bào)道。第二個(gè)文庫(kù)則分別以上一枚蛋產(chǎn)出后的6小時(shí)以及25小時(shí)(即鴨胚發(fā)育的第10期)作為實(shí)驗(yàn)材料(其中6小時(shí)仍作為驅(qū)動(dòng)組,25小時(shí)作為實(shí)驗(yàn)組),采用同樣的文庫(kù)構(gòu)建方法,最終共獲得了66條差異表達(dá)基因,比對(duì)后發(fā)現(xiàn)其中48條具有同源基因,另外18條無(wú)同源基因。在這66條基因中,有27條與第一文庫(kù)篩選出來(lái)的基