AS-NGR基因在中國鹵蟲胚胎發(fā)育，漸度、鹽度脅迫和蛻皮激素誘導(dǎo)下的表達(dá)模式.pdf

1、中國鹵蟲(Artemia sinica)是一種對環(huán)境適應(yīng)能力極強(qiáng)的小型甲殼動物，能在高鹽水體中生存，由于其生活方式的獨(dú)特性，目前已成為分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等研究中重要的模式生物。
　　神經(jīng)肽及神經(jīng)肽受體是近年來神經(jīng)科學(xué)研究方面的熱點(diǎn)問題，其在各類甲殼動物的生長、發(fā)育、繁殖、運(yùn)動等生理過程所起到的調(diào)節(jié)作用也越來越受到人們關(guān)注。鹵蟲作為一種小型甲殼動物，其體內(nèi)也必然存在著神經(jīng)肽與神經(jīng)肽受體并參與鹵蟲的相關(guān)生理調(diào)節(jié)，但目前對鹵

2、蟲神經(jīng)肽及受體的相關(guān)研究卻尚未見報(bào)道。
　　本研究采用RACE技術(shù)，首次從中國鹵蟲中克隆出一個(gè)神經(jīng)肽受體的cDNA全長序列，命名為As-NGR。采用生物信息學(xué)手段對該序列進(jìn)行了信息學(xué)分析;應(yīng)用原位雜交技術(shù)對As-NGR在中國鹵蟲胚胎發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)部位進(jìn)行了研究;應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對鹵蟲不同發(fā)育時(shí)期，鹽度、溫度脅迫和蛻皮激素誘導(dǎo)下As-NGR的表達(dá)量進(jìn)行了研究。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，As-NGR cDNA序列全長16

3、10bp，含一個(gè)1527bp的開放閱讀框，59bp的5'-非編碼區(qū)(UTR）和24bp3'-非編碼區(qū)(UTR)。對該序列進(jìn)行信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，As-NGR編碼的蛋白質(zhì)包含508個(gè)氨基酸，分子量為60.8kD，理論等電點(diǎn)為5.73，含有7TM_1和7TM_GPCR_Srw兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，是一個(gè)7次跨膜的疏水蛋白，屬于G蛋白偶聯(lián)受體視紫紅質(zhì)家族。
　　As-NGR廣泛分布于鹵蟲胚胎發(fā)育的各個(gè)時(shí)期和身體的各個(gè)部位，且不同發(fā)育時(shí)期的相對表達(dá)量有

4、所不同。鹵蟲發(fā)育為無節(jié)幼蟲前，其體內(nèi)As-NGR的表達(dá)量偏低且變化幅度不大，發(fā)育為無節(jié)幼蟲后，As-NGR的表達(dá)量上調(diào)，且在5d、7d上調(diào)幅度明顯。隨著鹽度的增加與溫度的下降，As-NGR的表達(dá)量均呈逐漸下調(diào)趨勢，且均低于正常水平。蛻皮激素誘導(dǎo)處理1h，As-NGR在有明顯的升高，2h時(shí)又迅速下降，趨于正常水平。
　　本研究結(jié)果表明，As-NGR在鹵蟲體內(nèi)的作用可能并非應(yīng)答溫度鹽度刺激信號，而是在蛻皮前期神經(jīng)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用的一