固定金屬離子親和膜的制備及其在木瓜蛋白酶分離純化中的應用.pdf

1、親和膜色譜技術具有流速高、分離速度快、壓降低、處理量大、選擇性強、易于放大規(guī)?；a等顯著優(yōu)點，在蛋白質的分離純化中得到了快速發(fā)展。
　　 木瓜蛋白酶(EC3.4.22.2)主要存在于番木瓜果實中的乳汁中，廣泛應用于食品、皮革、紡織、日化和制藥行業(yè)等行業(yè)，由于傳統(tǒng)的分離方法工藝繁瑣，純度不高，不能達到現(xiàn)代工業(yè)的需求，而且很難規(guī)?；a。
　　 本文以尼龍膜為基質，四種不同金屬離子作為配基，制備了一系列新型的分離木瓜蛋白酶

2、的材料，通過掃描電鏡，紅外光譜和電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜研究其物理性能，并研究金屬離子螯合的最佳條件，包括吸附時間、金屬離子溶液pH值、膜量等。同時對制備的固定金屬離子親和膜純化木瓜蛋白酶的色譜性能進行了研究，確定了純化的最佳條件，包括吸附的時間、緩沖液的pH值和離子強度以及洗脫液的種類、上樣速度、洗脫速度、洗脫液的pH值和離子強度等。最后，應用此親和膜從木瓜粉中純化木瓜蛋白酶，并用電泳進行了表征。本文還以動態(tài)學的方法研究了配基為不

3、同金屬離子的親和膜與木瓜蛋白酶之間的相互作用的等溫吸附和動力學模型。結果表明，螯合銅離子的最佳條件為30分鐘，pH4.0，電鏡照片顯示該固定金屬離子親和膜的孔徑明顯降低，但也足以讓大分子蛋白質自由通過，螯合在膜上的金屬量用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀檢測，分別為4402.1、658.1、339.6、1258.3μg/g(固定銅、鎳、鋅、鈷金屬離子親和膜)。而銅、鎳、鋅、鈷四種固定金屬離子親和膜吸附木瓜蛋白酶的最佳時間分別是60，50，

4、50，30分鐘；最佳反應pH值分別是8.0，10.0，9.0，9.0;最佳離子強度(即NaC1的濃度)都是0mol/L;最佳洗脫液為NaSCN溶液;最佳上樣速度都是2.0ml/min，最佳洗脫速度都是1.0ml/min，洗脫液的最佳pH值和離子強度(即NaCl的濃度)都是5.0和1.0mol/L;固定鋅離子親和膜洗脫下來酶的比酶活最高，其純化倍數(shù)為27.06;四種固定金屬離子親和膜對木瓜蛋白酶的吸附行為都滿足Freundlich模式，動