親和超濾載體的制備及其在純化胰蛋白酶中應(yīng)用的研究.pdf

1、該研究采用胰蛋白酶的特異抑制劑為配基,即對氨基苯甲脒和卵粘蛋白,合成了兩種親和超濾載體,以胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合物系為研究對象,分離純化目標胰蛋白酶.由于二者的分子量相近,單獨運用超濾的方法很難將二者完全分離開來,運用所合成的可溶性親和載體,通過吸附目標分子、清洗雜蛋白、洗脫目標分子在超濾體系中獲得純化的胰蛋白酶.主要研究內(nèi)容與結(jié)論如下:1.確定可溶性親和超濾載體的制備工藝并對其結(jié)構(gòu)進行表征采用200萬的可溶性葡聚糖為載體,通過環(huán)

2、氧氯丙烷活化,偶聯(lián)胰蛋白酶的特異抑制劑為親和配基,分別合成了兩種可溶性親和超濾載體,即對氨基苯甲脒親和超濾載體和卵粘蛋白親和超濾載體.確定了葡聚糖載體活化及其與兩種配基偶聯(lián)的條件,并對葡聚糖與環(huán)氧氯丙烷活化的反應(yīng)歷程進行分析.通過UV、IR、NMR的檢測分析,研究載體、活化載體、親和載體的結(jié)構(gòu)差異及其內(nèi)在聯(lián)系,對兩種親和載體進行結(jié)構(gòu)表征.得出活化的葡聚糖中含有活性基團,親和配基已經(jīng)連接到活化載體上.2.親和超濾過程的研究對合成的兩種親和

3、載體進行親和超濾過程的研究,考察對胰蛋白酶的純化效果.對吸附目標分子、清洗雜蛋白、洗脫目標分子的親和超濾過程工藝進行研究,確定吸附、洗脫的條件.3.親和載體的穩(wěn)定性分析對所合成的兩種親和超濾載體的使用次數(shù)、儲存時間、使用溫度范圍、使用的pH范圍進行考察,并用熱重分析技術(shù)考察親和載體的熱穩(wěn)定性.4.研究親和超濾過程的膜過濾特性主要研究親和載體在靜態(tài)、動態(tài)及動態(tài)電超濾情況下的超濾特性.從截留率和膜通量考慮,選擇10萬的PVDF超濾膜已能滿足