豬POU1F1基因多態(tài)性和mRNA表達(dá)相關(guān)性的研究.pdf

1、垂體特異性轉(zhuǎn)錄因子1(POU1F1)是調(diào)控垂體GH、PRL、TSH-β亞基轉(zhuǎn)錄的重要反式因子，對(duì)動(dòng)物正常的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的生理意義。POU1F1的突變可能造成人類的綜合性垂體激素缺乏癥，引起早期組織器官發(fā)育不全，產(chǎn)生侏儒體態(tài)等臨床病癥。而POU1F1對(duì)豬的生長(zhǎng)性狀同樣具有重要影響，被視為與生長(zhǎng)相關(guān)的候選基因之一。 本實(shí)驗(yàn)以大白豬(英系)、中畜黑豬、荷包豬、香豬為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)POU1F1基因的DNA多態(tài)性進(jìn)行PCR-SSCP和P

2、CR-RFLP檢測(cè)分析，同時(shí)提取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物垂體的總RNA，通過實(shí)時(shí)定量熒光PCR對(duì)POU1F1、GH、PRL、TSH-β的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行定量分析，尋找多態(tài)位點(diǎn)和基因表達(dá)量間可能存在的相關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)共確定了在第一內(nèi)含子(1515bp處)、第四外顯子(273bp處)和第四內(nèi)含子到第六外顯子上的4個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，并結(jié)合生產(chǎn)數(shù)據(jù)分析了上述位點(diǎn)的SNP與生長(zhǎng)性狀關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)不同豬種POU1F1第四外顯子(273bp處)的PCR-SSCP

3、各基因型分布存在較大差異，大白豬和中畜黑豬群體中以AA基因型為主，有少量AB基因型個(gè)體；而香豬群體中以BB基因型為主，無純合AA基因型；荷包豬群體中三種基因型均有分布。該位點(diǎn)AA基因型和大白豬的背膘厚(P＜0.05)顯著正相關(guān)。 此外，本研究還驗(yàn)證了第四內(nèi)含子到第六外顯子上一段1747bp的RsaⅠ-RFLP和PstⅠ-RFLP。4個(gè)豬種在該區(qū)段的RsaⅠ的酶切多態(tài)性分析表明，RsaⅠ-RFLP位點(diǎn)的多態(tài)性在中外豬種中均有分布，

4、且各豬種均以AA基因型分布為主，同時(shí)散在AB和BB基因型分布。近一步研究顯示荷包豬BB基因型可提高斷奶前日增重，而中畜黑豬B等位基因的加入可能導(dǎo)致POU1F1表達(dá)量的提高。大白豬PstⅠ-RFLP顯示，該多態(tài)位點(diǎn)A等位基因雖與PRL表達(dá)量存在極顯著正相關(guān)(P＜0.01)，但是與生長(zhǎng)性狀并無顯著性相關(guān)(P＞0.1)。 POU1F1的第一內(nèi)含子1515bp處存在T→C的突變，該突變和屠宰前日增重相關(guān)系數(shù)為R=-0.6(P＜0.05)

5、，并且該位點(diǎn)的替換和屠宰前GH的表達(dá)量存在顯著相關(guān)(R=0.483，P＜0.05)，由此推論T→C的替換將導(dǎo)致GH的mRNA表達(dá)量升高，但在生長(zhǎng)性狀上表現(xiàn)為屠宰前日增重降低。 對(duì)各個(gè)基因表達(dá)量間的相關(guān)分析表明，POU1F1和GH、PRL、TSH-β的表達(dá)量呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)。 對(duì)豬POU1F1候選基因功能及生長(zhǎng)性狀上的作用的研究，得到以下結(jié)果1.驗(yàn)證了第四外顯子上的一個(gè)PCR-SSCP多態(tài)位點(diǎn)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)的

6、突變可能引起豬背膘厚和初生重的降低； 2.驗(yàn)證了1747bp擴(kuò)增片段的RsaⅠ酶切多態(tài)位點(diǎn)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)的突變可能造成POU1F1表達(dá)水平的提高，并提高豬的早期日增重： 3.驗(yàn)證了1747bp擴(kuò)增片段的PstⅠ酶切多態(tài)位點(diǎn)，在RNA表達(dá)上發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)的突變可能造成POU1F1和PRL的mRNA表達(dá)水平降低： 4.發(fā)現(xiàn)了第一內(nèi)含子上一個(gè)新的T→C的替換位點(diǎn)，該位點(diǎn)的替換和GH的表達(dá)量存在相關(guān)，并對(duì)后期的體重增長(zhǎng)產(chǎn)生