神經(jīng)干細(xì)胞在膠原凝膠及膠原-殼聚糖支架內(nèi)的培養(yǎng).pdf

1、傳統(tǒng)的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)模式分為“懸浮培養(yǎng)”和“單層貼壁培養(yǎng)”。但這兩種方式都存在不可回避的缺點(diǎn)。近年來(lái)，三維培養(yǎng)技術(shù)逐漸成為細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，這種培養(yǎng)方式可以使細(xì)胞呈空間立體方式生長(zhǎng)，使其更接近于體內(nèi)生長(zhǎng)模式，形成類(lèi)似體內(nèi)組織的結(jié)構(gòu)，發(fā)揮其功能。由于三維培養(yǎng)模式既有利于誘導(dǎo)細(xì)胞的定向分化及分化后表型的維持，又有望在體外構(gòu)建與各類(lèi)組織、器官相應(yīng)的細(xì)胞三維生長(zhǎng)類(lèi)似物或等同物，因此，這項(xiàng)培養(yǎng)技術(shù)對(duì)組織工程學(xué)和臨床應(yīng)用都有重要意義。

2、 本論文采用三維培養(yǎng)模式培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)選擇使用天然的生物材料鼠尾Ⅰ型膠原蛋白與殼聚糖復(fù)合作為細(xì)胞的支架材料。首先考察了膠原蛋白與神經(jīng)干細(xì)胞的生物相容性，包括生物安全性和生物功能性。然后將鼠尾Ⅰ型膠原蛋白與殼聚糖通過(guò)低溫凍干并交聯(lián)，再進(jìn)行2次凍干制備膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架，應(yīng)用掃描電鏡觀察其表面的微觀結(jié)構(gòu)，并通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明神經(jīng)干細(xì)胞與復(fù)合支架的相容性，最后采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察支架上經(jīng)免疫熒光染色后的神經(jīng)干細(xì)胞，獲得以下結(jié)果

3、： (1)膠原與神經(jīng)干細(xì)胞的生物相容性：?jiǎn)蝹€(gè)神經(jīng)干細(xì)胞均勻分散在膠原凝膠內(nèi)，培養(yǎng)3天后，細(xì)胞間界限不很清楚，出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞團(tuán)簇：膠原凝膠中的神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)活力良好，大部分呈Nestin、BrdU陽(yáng)性；細(xì)胞培養(yǎng)的最優(yōu)膠原濃度為0.5mg/ml，細(xì)胞的最適接種密度是1×106cells/ml。 (2)膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架的制備及性能：采用低溫凍干法，5mg/ml的鼠尾Ⅰ型膠原和2％殼聚糖分別以體積比9:1、7:3、5:5制備復(fù)

4、合支架，支架的孔徑、吸水率、降解率等結(jié)果顯示，體積比為7:3的復(fù)合支架更適合于細(xì)胞的生長(zhǎng)和粘附。 (3)統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)表明，膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架具有較好的細(xì)胞親和性，神經(jīng)干細(xì)胞能夠沿著不規(guī)則的孔道壁粘附、伸展、延伸，細(xì)胞的活力檢測(cè)結(jié)果顯示：培養(yǎng)至第6天的神經(jīng)干細(xì)胞具有73±2.8％的高活率，熒光染色結(jié)果表明：復(fù)合支架內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞能夠分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞，維持了干細(xì)胞的特性。 由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們推斷：膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架