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文檔簡介
1、傳統(tǒng)的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)模式分為“懸浮培養(yǎng)”和“單層貼壁培養(yǎng)”。但這兩種方式都存在不可回避的缺點(diǎn)。近年來,三維培養(yǎng)技術(shù)逐漸成為細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn),這種培養(yǎng)方式可以使細(xì)胞呈空間立體方式生長,使其更接近于體內(nèi)生長模式,形成類似體內(nèi)組織的結(jié)構(gòu),發(fā)揮其功能。由于三維培養(yǎng)模式既有利于誘導(dǎo)細(xì)胞的定向分化及分化后表型的維持,又有望在體外構(gòu)建與各類組織、器官相應(yīng)的細(xì)胞三維生長類似物或等同物,因此,這項(xiàng)培養(yǎng)技術(shù)對組織工程學(xué)和臨床應(yīng)用都有重要意義。
2、 本論文采用三維培養(yǎng)模式培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)選擇使用天然的生物材料鼠尾Ⅰ型膠原蛋白與殼聚糖復(fù)合作為細(xì)胞的支架材料。首先考察了膠原蛋白與神經(jīng)干細(xì)胞的生物相容性,包括生物安全性和生物功能性。然后將鼠尾Ⅰ型膠原蛋白與殼聚糖通過低溫凍干并交聯(lián),再進(jìn)行2次凍干制備膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架,應(yīng)用掃描電鏡觀察其表面的微觀結(jié)構(gòu),并通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn),說明神經(jīng)干細(xì)胞與復(fù)合支架的相容性,最后采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察支架上經(jīng)免疫熒光染色后的神經(jīng)干細(xì)胞,獲得以下結(jié)果
3、: (1)膠原與神經(jīng)干細(xì)胞的生物相容性:單個神經(jīng)干細(xì)胞均勻分散在膠原凝膠內(nèi),培養(yǎng)3天后,細(xì)胞間界限不很清楚,出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞團(tuán)簇:膠原凝膠中的神經(jīng)干細(xì)胞生長活力良好,大部分呈Nestin、BrdU陽性;細(xì)胞培養(yǎng)的最優(yōu)膠原濃度為0.5mg/ml,細(xì)胞的最適接種密度是1×106cells/ml。 (2)膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架的制備及性能:采用低溫凍干法,5mg/ml的鼠尾Ⅰ型膠原和2%殼聚糖分別以體積比9:1、7:3、5:5制備復(fù)
4、合支架,支架的孔徑、吸水率、降解率等結(jié)果顯示,體積比為7:3的復(fù)合支架更適合于細(xì)胞的生長和粘附。 (3)統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)表明,膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架具有較好的細(xì)胞親和性,神經(jīng)干細(xì)胞能夠沿著不規(guī)則的孔道壁粘附、伸展、延伸,細(xì)胞的活力檢測結(jié)果顯示:培養(yǎng)至第6天的神經(jīng)干細(xì)胞具有73±2.8%的高活率,熒光染色結(jié)果表明:復(fù)合支架內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞能夠分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞,維持了干細(xì)胞的特性。 由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們推斷:膠原—?dú)ぞ厶菑?fù)合支架
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