殼聚糖-絲素共混凝膠及其作為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)支架的初步研究.pdf

1、內(nèi)部呈三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的高分子水凝膠具備較大的孔隙率，保水性強，力學(xué)性能與脂肪組織相近，是最有可能用作脂肪組織工程支架的一類材料。本文用殼聚糖與絲素蛋白共混，通過β-甘油磷酸鈉的誘導(dǎo)，制備可在較短時間內(nèi)形成的殼聚糖/絲素共混凝膠，利用絲素蛋白對細(xì)胞的親和性提高殼聚糖凝膠對細(xì)胞的黏附和引導(dǎo)生長能力。研究凝膠中殼聚糖/絲素比例的改變對凝膠孔結(jié)構(gòu)、粘彈性、抗壓強度的影響。并從SD大鼠活體內(nèi)分離得到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs），經(jīng)CD34、CD9

2、0鑒定和地塞米松誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞，確認(rèn)其干細(xì)胞的生物學(xué)特性后，接種于殼聚糖/絲素共混凝膠內(nèi)，經(jīng)體外培養(yǎng)，初步研究用殼聚糖和絲素共混后，形成的凝膠對細(xì)胞黏附和生長的影響。
　　首先，本文制備了不同質(zhì)量比的殼聚糖/絲素共混凝膠，研究殼聚糖/絲素共混比對凝膠化時間、凝膠內(nèi)部孔結(jié)構(gòu)、凝膠的粘彈性和抗壓強度的影響。結(jié)果表明，殼聚糖和絲素蛋白混合溶液在β-甘油磷酸鈉的誘導(dǎo)下，可在較短時間內(nèi)轉(zhuǎn)變成共混凝膠。殼聚糖/絲素比例為75/25及50/

3、50時，凝膠化時間分別為15min和25min。殼聚糖/絲素共混比為75/25、50/50、25/75的凝膠內(nèi)部的平均孔徑分別為96.58μm、118.26μm和132.67μm，絲素所占的比例較大的凝膠內(nèi)部的孔徑較大。壓縮性能和粘彈性測試結(jié)果表明，殼聚糖/絲素共混凝膠具有彈性材料的力學(xué)性能，當(dāng)殼聚糖/絲素共混比為75/25時，凝膠顯示出較大的抗壓強度。
　　其次，分離獲得大鼠的BMSCs，進行CD34、CD90鑒定，并向成脂肪細(xì)

4、胞的誘導(dǎo)分化。CD34、CD90鑒定結(jié)果證明，采用本文所述方法成功地分離獲得了大鼠的BMSCs。獲得的BMSCs成漩渦狀生長，形態(tài)均一，細(xì)胞排列緊密且細(xì)胞生長至第6-7天時，細(xì)胞融合度達到80-90％。BMSCs經(jīng)地塞米松的誘導(dǎo)后，經(jīng)油紅O染色鑒定證明，可分化為脂肪細(xì)胞。
　　再次，將大鼠的BMSCs接種于殼聚糖/絲素共混凝膠內(nèi)，初步研究了用殼聚糖/絲素共混后形成的凝膠對細(xì)胞黏附和生長的影響。體外培養(yǎng)后經(jīng)激光共聚焦顯微鏡和掃描電子