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1、內(nèi)部呈三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的高分子水凝膠具備較大的孔隙率,保水性強(qiáng),力學(xué)性能與脂肪組織相近,是最有可能用作脂肪組織工程支架的一類材料。本文用殼聚糖與絲素蛋白共混,通過β-甘油磷酸鈉的誘導(dǎo),制備可在較短時(shí)間內(nèi)形成的殼聚糖/絲素共混凝膠,利用絲素蛋白對(duì)細(xì)胞的親和性提高殼聚糖凝膠對(duì)細(xì)胞的黏附和引導(dǎo)生長(zhǎng)能力。研究凝膠中殼聚糖/絲素比例的改變對(duì)凝膠孔結(jié)構(gòu)、粘彈性、抗壓強(qiáng)度的影響。并從SD大鼠活體內(nèi)分離得到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),經(jīng)CD34、CD9
2、0鑒定和地塞米松誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞,確認(rèn)其干細(xì)胞的生物學(xué)特性后,接種于殼聚糖/絲素共混凝膠內(nèi),經(jīng)體外培養(yǎng),初步研究用殼聚糖和絲素共混后,形成的凝膠對(duì)細(xì)胞黏附和生長(zhǎng)的影響。
首先,本文制備了不同質(zhì)量比的殼聚糖/絲素共混凝膠,研究殼聚糖/絲素共混比對(duì)凝膠化時(shí)間、凝膠內(nèi)部孔結(jié)構(gòu)、凝膠的粘彈性和抗壓強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明,殼聚糖和絲素蛋白混合溶液在β-甘油磷酸鈉的誘導(dǎo)下,可在較短時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)變成共混凝膠。殼聚糖/絲素比例為75/25及50/
3、50時(shí),凝膠化時(shí)間分別為15min和25min。殼聚糖/絲素共混比為75/25、50/50、25/75的凝膠內(nèi)部的平均孔徑分別為96.58μm、118.26μm和132.67μm,絲素所占的比例較大的凝膠內(nèi)部的孔徑較大。壓縮性能和粘彈性測(cè)試結(jié)果表明,殼聚糖/絲素共混凝膠具有彈性材料的力學(xué)性能,當(dāng)殼聚糖/絲素共混比為75/25時(shí),凝膠顯示出較大的抗壓強(qiáng)度。
其次,分離獲得大鼠的BMSCs,進(jìn)行CD34、CD90鑒定,并向成脂肪細(xì)
4、胞的誘導(dǎo)分化。CD34、CD90鑒定結(jié)果證明,采用本文所述方法成功地分離獲得了大鼠的BMSCs。獲得的BMSCs成漩渦狀生長(zhǎng),形態(tài)均一,細(xì)胞排列緊密且細(xì)胞生長(zhǎng)至第6-7天時(shí),細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%。BMSCs經(jīng)地塞米松的誘導(dǎo)后,經(jīng)油紅O染色鑒定證明,可分化為脂肪細(xì)胞。
再次,將大鼠的BMSCs接種于殼聚糖/絲素共混凝膠內(nèi),初步研究了用殼聚糖/絲素共混后形成的凝膠對(duì)細(xì)胞黏附和生長(zhǎng)的影響。體外培養(yǎng)后經(jīng)激光共聚焦顯微鏡和掃描電子
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