4-甲基咪唑?qū)撬栝g質(zhì)干細(xì)胞生物特性的影響及膠原-殼聚糖支架初步制備研究.pdf

1、目的:探究4-甲基咪唑(4-MI)對(duì)骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)生物學(xué)特性的影響用來(lái)說(shuō)明對(duì)人體可能產(chǎn)生的潛在毒性作用;研究真皮間質(zhì)干細(xì)胞(DMSCs)和膠原-殼聚糖支架之間的生物相容性。
　　方法:(1)采用全骨髓法分離培養(yǎng)大鼠BMSCs，借助細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征以及表面抗原標(biāo)記來(lái)對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性鑒定。(2)采用MTT法檢測(cè)4-MI對(duì)BMSCs增殖能力的影響，通過(guò)濃度梯度篩選出100μg/ml作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的作用濃度;通過(guò)平板克隆實(shí)驗(yàn)來(lái)

2、檢測(cè)4-MI對(duì)BMSCs克隆形成能力的影響;通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)4-MI對(duì)BMSCs遷移能力的影響;流式細(xì)胞儀分析4-MI對(duì)BMSCs細(xì)胞周期和凋亡的影響;通過(guò)ALP染色和油紅O染色以及RT-PCR檢測(cè)BMP-3、PPARγ-2的表達(dá)水平分析4-MI對(duì)BMSCs多向分化能力的影響;RT-PCR檢測(cè)4-MI作用后，BMSCs細(xì)胞因子的表達(dá)情況;染色體核型分析檢測(cè)4-MI對(duì)BMSCs染色體數(shù)目和形態(tài)的影響。(3)分離培養(yǎng)新生SD

3、乳鼠DMSCs。(4)制備膠原-殼聚糖支架。(5)觀(guān)察DMSCs在膠原-殼聚糖支架上的形態(tài)特征，并進(jìn)行細(xì)胞黏附性檢測(cè);MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DMSCs在支架上的增殖活性。
　　結(jié)果:(1)MTT結(jié)果表明4-MI可以抑制BMSCs的增殖，并呈濃度與時(shí)間依賴(lài)性，當(dāng)實(shí)驗(yàn)組4-MI濃度為100μg/ml時(shí)，BMSCs在克隆形成能力、遷移、成骨成脂分化、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡以及分泌具有造血支持作用的細(xì)胞因子方面，與對(duì)照組相比并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，同樣在染色