siRNA干擾BMP-7對人肝癌HepG2細(xì)胞增殖和遷移的影響.pdf

1、1分類號：密級：UDC：學(xué)號：416523613052南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位碩士碩士研究生學(xué)位論文siRNA干擾干擾BMP7對人肝癌對人肝癌HepG2細(xì)胞增殖和細(xì)胞增殖和遷移的影響遷移的影響EffectsofsiRNAtargetingBMP7ontheProliferationMigrationofHumanLiverCancerHepG2Cells盧燕軍培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：吳建兵主任醫(yī)師教授專業(yè)學(xué)位

2、種類：臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：腫瘤學(xué)論文答辯日期：2016年5月答辯委員會主席：徐方云評閱人：陳麗周存才2016年5月摘要II摘要目的：目的：觀察RNA干擾技術(shù)(RNAinterferenceRNAi)抑制骨形態(tài)發(fā)生蛋白7(bonemphogeicproteinBMP7)的表達(dá)對人肝癌細(xì)胞增殖、遷移和周期的影響。方法：方法：1、通過半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)、蛋白印跡（Westernblot）技術(shù)從人肝癌細(xì)胞株HepG2和

3、SMMC7721中篩選出BMP7基因高表達(dá)細(xì)胞株。2、設(shè)計并化學(xué)合成3對BMP7小干擾RNA(smallinterferingRNAsiRNA)序列，陽離子脂質(zhì)體法瞬間轉(zhuǎn)染BMP7高表達(dá)肝癌細(xì)胞，并設(shè)NomalControl組、NegativeControl組及BMP7siRNA1、BMP7siRNA2、BMP7siRNA3各轉(zhuǎn)染組。3、采用RTPCR和Westernblot法檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞BMP7mRNA和蛋白的表達(dá)變化，篩選BM

4、P7最佳沉默序列進(jìn)行后續(xù)實驗。4、通過MTT比色法檢測各組細(xì)胞增殖能力變化并繪制細(xì)胞生長曲線。5、Transwell遷移實驗檢測各組細(xì)胞遷移能力。6、通過Westernblot法檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白（Bcl2、Bax、Caspase3）的表達(dá)情況。7、流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞周期分布。結(jié)果：結(jié)果：1、RTPCR及Westernblot結(jié)果顯示：2種肝癌細(xì)胞株均有BMP7基因表達(dá)，其中以HepG2細(xì)胞BMP7相對表達(dá)量最高。選擇