水通道蛋白9對人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖、凋亡和侵襲遷移的影響.pdf

1、目的：研究水通道蛋白9（ Aquaporin9,AQP9）對人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖、凋亡和侵襲遷移的影響。
　　方法：構(gòu)建靶向AQP9基因的慢病毒過表達(dá)載體，利用293T包裝細(xì)胞獲得重組慢病毒并轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞并用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定細(xì)胞株，激光共聚焦驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率，qRT-PCR及Western blot檢測AQP9表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)分組：CC組為無慢病毒轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞、PWPI組為空載體慢病毒轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞，過表達(dá)A

2、QP9組為含過表達(dá)AQP9基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞。利用平板克隆、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)以及流式細(xì)胞儀分別檢測 AQP9對 HepG2增殖、遷移、侵襲、凋亡以及周期的影響。多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：激光共聚焦顯示，HepG2細(xì)胞膜在轉(zhuǎn)染AQP9后高表達(dá)綠色熒光蛋白，qRT-PCR及WB檢測AQP9的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)較其他兩組均明顯上升,差異均

3、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p均<0.01)。平板克隆結(jié)果顯示， CC組、PWPI組和過表達(dá) AQP9組克隆形成率分別為（23.53±2.10）％、（23.00±2.02）%、（16.93±3.19）%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.46，P=0.032<0.05）。流式測凋亡結(jié)果顯示，CC組、PWPI組和過表達(dá)AQP9組總凋亡率分別為：（19.70±2.49）%、（24.37±2.38）%、（44.96±3.53）%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=66

4、.88，P<0.01），與PWPI組和CC組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p均<0.01）；流式測周期結(jié)果顯示，CC組、PWPI組和過表達(dá)AQP9組細(xì)胞停留在S期和G1期的細(xì)胞百分比分別為（34.39±4.33）%和（54.58±0.89）%；（35.65±1.39）%和（53.08±2.06）%；（15.25±1.81）%和（66.58±0.99）%，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F值分別為49.25和82.09，P均<0.01）。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果顯示，過表達(dá) AQP9組細(xì)胞24h的遷移率為（6.38±1.70）%，與PWPI組（16.74±1.40）%比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01<0.05)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過表達(dá)AQP9組24h穿過細(xì)胞數(shù)為（17±8）個(gè)，與PWPI組（95±11）個(gè)和CC組（109±9）個(gè)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）。
　　結(jié)論：AQP9能夠抑制HepG2細(xì)胞遷移和侵襲能力，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡并通過產(chǎn)生G1/S期