水通道蛋白9對人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖、凋亡和侵襲遷移的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究水通道蛋白9( Aquaporin9,AQP9)對人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖、凋亡和侵襲遷移的影響。
  方法:構(gòu)建靶向AQP9基因的慢病毒過表達(dá)載體,利用293T包裝細(xì)胞獲得重組慢病毒并轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞并用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定細(xì)胞株,激光共聚焦驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率,qRT-PCR及Western blot檢測AQP9表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)分組:CC組為無慢病毒轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞、PWPI組為空載體慢病毒轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞,過表達(dá)A

2、QP9組為含過表達(dá)AQP9基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞。利用平板克隆、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)以及流式細(xì)胞儀分別檢測 AQP9對 HepG2增殖、遷移、侵襲、凋亡以及周期的影響。多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析,兩組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。
  結(jié)果:激光共聚焦顯示,HepG2細(xì)胞膜在轉(zhuǎn)染AQP9后高表達(dá)綠色熒光蛋白,qRT-PCR及WB檢測AQP9的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)較其他兩組均明顯上升,差異均

3、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均<0.01)。平板克隆結(jié)果顯示, CC組、PWPI組和過表達(dá) AQP9組克隆形成率分別為(23.53±2.10)%、(23.00±2.02)%、(16.93±3.19)%,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.46,P=0.032<0.05)。流式測凋亡結(jié)果顯示,CC組、PWPI組和過表達(dá)AQP9組總凋亡率分別為:(19.70±2.49)%、(24.37±2.38)%、(44.96±3.53)%,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=66

4、.88,P<0.01),與PWPI組和CC組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均<0.01);流式測周期結(jié)果顯示,CC組、PWPI組和過表達(dá)AQP9組細(xì)胞停留在S期和G1期的細(xì)胞百分比分別為(34.39±4.33)%和(54.58±0.89)%;(35.65±1.39)%和(53.08±2.06)%;(15.25±1.81)%和(66.58±0.99)%,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為49.25和82.09,P均<0.01)。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果顯示,過表達(dá) AQP9組細(xì)胞24h的遷移率為(6.38±1.70)%,與PWPI組(16.74±1.40)%比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01<0.05)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,過表達(dá)AQP9組24h穿過細(xì)胞數(shù)為(17±8)個(gè),與PWPI組(95±11)個(gè)和CC組(109±9)個(gè)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。
  結(jié)論:AQP9能夠抑制HepG2細(xì)胞遷移和侵襲能力,誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡并通過產(chǎn)生G1/S期

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