As2O3聯(lián)合AZT作用對肝癌HepG2細(xì)胞遷移和侵襲的影響.pdf

1、目的：觀察三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）聯(lián)合3’-疊氮-3’-脫氧胸腺核苷（3’-azido-3’-deoxythymidine，Azidothymidine，AZT）即齊多夫定，對肝癌HepG2細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，并探討其可能的作用機制，為兩藥聯(lián)合在肝癌的體內(nèi)研究和臨床治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞系，采用劃痕愈合實驗檢測As2O3（2μmol/L）、AZT（20

2、μmol/L）及As2O3聯(lián)合AZT（終濃度為2和20μmol/L）干預(yù)后HepG2細(xì)胞的橫向遷移能力；Transwell遷移和侵襲實驗觀察As2O3、AZT及As2O3聯(lián)合AZT干預(yù)后HepG2細(xì)胞的縱向遷移和侵襲能力；實時熒光定量PCR法檢測兩單藥組和聯(lián)合組干預(yù)HepG2細(xì)胞后MMP2、VEGF基因的表達(dá)水平；蛋白印跡法檢測各組干預(yù)HepG2細(xì)胞后MMP2、VEGF、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表達(dá)量。
　　常規(guī)培養(yǎng)人

3、正常肝細(xì)胞系HL-7702，采用實時熒光定量PCR法檢測HL-7702細(xì)胞和HepG2細(xì)胞中PTK6基因的表達(dá)水平，并檢測經(jīng)As2O3、AZT及As2O3聯(lián)合AZT干預(yù)后HepG2細(xì)胞中PTK6基因的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　劃痕實驗結(jié)果顯示，經(jīng)As2O3聯(lián)合AZT干預(yù)后HepG2細(xì)胞平面遷移到損傷區(qū)的細(xì)胞數(shù)明顯少于單藥組和空白對照組（P<0.01）。Transwell遷移及侵襲實驗結(jié)果顯示，As2O3聯(lián)合AZT干預(yù)組He

4、pG2細(xì)胞趨化運動明顯減少，穿膜的細(xì)胞較對照組及各單藥組顯著降低（P<0.01）。實時熒光定量PCR法發(fā)現(xiàn)，As2O3聯(lián)合AZT干預(yù)組HepG2細(xì)胞中MMP2、VEGF基因的表達(dá)水平明顯低于對照組和各單藥組（P<0.01）。蛋白印跡結(jié)果顯示聯(lián)合給藥組MMP2、VEGF和p-ERK1/2表達(dá)明顯降低（P<0.01），ERK1/2無明顯變化（P>0.05），p-ERK1/2與ERK1/2的比值明顯降低（P<0.01）。
　　實時熒光定

5、量PCR法發(fā)現(xiàn)，人肝癌HepG2細(xì)胞中PTK6基因的表達(dá)水平明顯低于人正常肝細(xì)胞HL-7702（P<0.01），經(jīng)As2O3聯(lián)合AZT干預(yù)后HepG2細(xì)胞中PTK6的表達(dá)量明顯高于空白對照組及單藥組（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　（1）As2O3聯(lián)合AZT能夠協(xié)同抑制人肝癌HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲。
　?。?）As2O3聯(lián)合AZT抑制HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲，其作用可能是通過調(diào)控ERK1/2信號通路的磷酸化以及