NGAL在ADV早期腎損傷中的表達(dá)及臨床應(yīng)用價(jià)值的初步研究.pdf

1、目的:
　　長(zhǎng)期口服阿德福韋酯(ADV)治療慢性乙型病毒性肝炎最常見(jiàn)的不良反應(yīng)是腎功能損傷，目前臨床上常用SCr、BUN、eGFR、血磷等作為ADV腎損傷的診斷指標(biāo)，但這些傳統(tǒng)指標(biāo)對(duì)診斷早期腎損傷敏感性和特異性較低。已有大量研究證明中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)對(duì)各種病因引起的急性或慢性腎損傷均有很好的診斷價(jià)值。本研究通過(guò)橫斷面研究檢測(cè)ADV單藥或聯(lián)用其它核苷（酸）類(lèi)似物(NA)的慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者的血

2、清及尿NGAL濃度水平，與SCr、eGFR、CysC、血磷等比較在ADV早期腎損傷的臨床診斷價(jià)值。同時(shí)通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究NGAL在長(zhǎng)期灌服ADV等核苷（酸）類(lèi)似物大鼠腎臟損傷模型中的表達(dá)水平及部位。
　　方法:
　　本研究共有兩部分:第一部分，臨床橫斷面研究。選取2016年2月到2016年11月在長(zhǎng)海醫(yī)院感染科門(mén)診長(zhǎng)期口服ADV單藥或ADV聯(lián)合LAM、ADV聯(lián)合ETV的CHB患者124例。跟據(jù)患者的eGFR水平分為正常腎功能

3、組（A組:eGFR≥90ml/min）91例，腎功能損傷組(B組:eGFR＜90ml/min)33例，選取同期在門(mén)診隨訪的55例HBV穩(wěn)定攜帶者，63例口服ETV患者作為對(duì)照組。整理患者門(mén)診檢查的eGFR、SCr、CysC、血磷等腎臟傳統(tǒng)指標(biāo)。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)獲得各組CHB患者的血清和尿NGAL濃度。統(tǒng)計(jì)分析比較NGAL與其他傳統(tǒng)腎損傷標(biāo)記物對(duì)診斷ADV引起的早期腎損傷的敏感性，Pearson相關(guān)分析進(jìn)一步了解血清和尿NGAL與年齡

4、、性別、SCr、eGFR，CysC、β2-MG、尿微量白蛋白、血磷之間的相關(guān)性。年齡分層下比較ADV腎功能損傷組NGAL濃度差異。
　　第二部分，研究NGAL在ADV、TDF、ETV誘導(dǎo)的大鼠腎臟中的表達(dá)及部位。通過(guò)長(zhǎng)期給予SD大鼠ADV、TDF、ETV，建立相應(yīng)藥物誘導(dǎo)的腎損傷模型，分別于8周、12周、16周檢測(cè)并分析各組大鼠血清和尿NGAL的水平，通過(guò)HE染色了解各組大鼠腎臟的病理變化，免疫組化法檢測(cè)腎臟組織中NGAL表達(dá)程度

5、及部位。采用SPSS22.0軟件處理數(shù)據(jù)，P＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.血清NGAL雖然在ADV腎損傷組高于其它各組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。ADV腎損傷組尿NGAL明顯高于ETV組和穩(wěn)定攜帶組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但尿 NGAL升高并沒(méi)有血清肌酐和胱抑素C明顯。
　　2.相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清和尿NGAL成正相關(guān)，兩者與年齡成正相關(guān)(P＜0.05)，與性別、服藥時(shí)間、TB、eGFR、肌酐

6、、胱抑素C、血鈣、血磷、β2微球蛋白無(wú)相關(guān)性，此外尿NGAL與尿微量白蛋白成正相關(guān)(r=0.435，P＜0.05)。根據(jù)年齡分層結(jié)果顯示，年齡越高，血清和尿NGAL越高，且50-59歲組、大于59歲組與小于50歲組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。
　　3.動(dòng)物試驗(yàn)中，血清和尿NGAL隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，在ADV組，16周血NGAL明顯高于12周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，16周尿NGAL高于8周和12周，差異均有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義;在TDF組中，16周血和尿NGAL明顯高于8周(P＜0.05);ETV組和對(duì)照組在8周、12周、16周均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。各組在同一時(shí)間點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)，ADV組血清和尿NGAL水平在8周、16周明顯高于空白對(duì)照組和ETV組;TDF組血清和尿NGAL僅在16周與對(duì)照組比較有差異;ETV組血清和尿NGAL在8周、12周、16周與對(duì)照組均無(wú)明顯差異。HE染色發(fā)現(xiàn)，在第8周，ADV組腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，12周、16周腎小管

8、上皮細(xì)胞腫脹加重，可見(jiàn)空泡變性，腎小管細(xì)胞刷狀緣脫落，部分管腔內(nèi)可見(jiàn)蛋白管型。TDF組在16周腎小管上皮細(xì)胞有輕度顆粒變性，未見(jiàn)管型;所有各組腎臟間質(zhì)和腎小球無(wú)明顯變化。免疫組化顯示NGAL主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞，腎間質(zhì)和腎小球有少量表達(dá)。ADV組在12周、16周NGAL表達(dá)高于對(duì)照組，TDF組在16周NGAL免疫組化結(jié)果與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且表達(dá)強(qiáng)度與病理?yè)p傷時(shí)間有一定的相關(guān)性，ETV組和與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P＞0.05)。

9、>　　結(jié)論:
　　1.ADV腎損傷組患者尿NGAL明顯高于對(duì)照組，但尿NGAL診斷ADV早期腎損傷敏感性沒(méi)有肌酐、胱抑素C高，血清NGAL對(duì)ADV早期腎損傷無(wú)診斷價(jià)值。
　　2.血清NGAL與年齡成正相關(guān)，尿NGAL與年齡、尿微量白蛋白成正相關(guān)。NGAL對(duì)ADV引起的高齡CHB患者腎損傷有更好的診斷價(jià)值。
　　3.在大鼠實(shí)驗(yàn)組，隨著ADV、TDF用藥時(shí)間的增加，血清和尿NGAL水平明顯升高，尿NGAL比血清NGAL升高