食管鱗癌中RASSF7的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的:食管癌是常見的人類消化道腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人類健康，是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生事件之一。中國(guó)是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，近年來食管癌的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，然而其具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。大多認(rèn)為是由生物、化學(xué)以及遺傳等多因素引起的多基因改變、多階段累積的復(fù)雜病理過程。研究其發(fā)病機(jī)制并控制其發(fā)生發(fā)展，改善人類健康狀況是目前亟待解決的問題。
　　RAS相關(guān)區(qū)域家族(Ras-association domain family,

2、 RASSF)共包含10名成員，RASSF1～10。該家族又分為兩組，傳統(tǒng)的RAS SF1～6和N-末端成員RASSF7～10。RASSF7位于11p15.5，有6個(gè)外顯子，由于選擇性剪切的作用形成3個(gè)亞型，分別是RASSF7A、RASSF7B和RASSF7C，分別編碼320、337和373個(gè)氨基酸。
　　目前關(guān)于RAS相關(guān)結(jié)構(gòu)域家族基因1A(RAS association domainfamily gene1A，RASSF1A)

3、在食管癌中的各種研究較為深入。然而有關(guān)RASSF7在食管鱗癌的研究尚未見報(bào)道。本研究通過檢測(cè)69例食管鱗癌組織、相應(yīng)癌旁正常組織和5-aza-dC處理前后4株食管癌細(xì)胞系中RASSF7mRNA表達(dá)情況及甲基化狀態(tài)，以及應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)69例食管癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織中RASSF7的蛋白表達(dá)情況，探究其與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　方法:
　　1、應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptio

4、n polymerase chainreaction，RT-PCR)技術(shù)分別檢測(cè)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine，5-aza-dC)處理前后的食管癌細(xì)胞系(TE13、T.Tn、YES-2、Ec109)和69例食管鱗癌組織及其相應(yīng)癌旁正常組織中RASSF7基因mRNA表達(dá)水平。
　　2、應(yīng)用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC) SP法檢測(cè)69例

5、食管鱗癌組織及其相應(yīng)癌旁正常組織中RASSF7蛋白的表達(dá)情況。
　　3、應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation specific polymerase chain reaction，MSP)技術(shù)分別檢測(cè)應(yīng)用5-aza-dC處理前后的食管癌細(xì)胞系和69例食管鱗癌組織及其相應(yīng)癌旁正常組織中RASSF7基因的甲基化狀態(tài)。
　　4、運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1、食管癌細(xì)

6、胞系中RASSF7的mRNA表達(dá)情況及甲基化狀態(tài)
　　1.15-aza-dC處理前后食管癌細(xì)胞系中RASSF7的mRNA表達(dá)
　　未處理的四株食管癌細(xì)胞株中，TE13、T.Tn、YES-2細(xì)胞株中RASSF7基因mRNA表達(dá)呈陽性，Ec109細(xì)胞株中RASSF7基因表達(dá)缺失，應(yīng)用甲基化抑制劑5-aza-dC處理后，TE13、T.Tn、YES-2細(xì)胞株中RASSF7基因表達(dá)下調(diào)，Ec109細(xì)胞株中檢測(cè)出RASSF7 mRNA的

7、表達(dá)。
　　1.25-aza-dC處理前后的食管癌細(xì)胞系中RASSF7基因的甲基化狀態(tài)
　　應(yīng)用甲基化抑制劑5-aza-dC處理前后的4株食管癌細(xì)胞系中均未檢測(cè)到RASSF7基因的異常甲基化狀態(tài)。
　　2、食管鱗癌組織中RASSF7基因的表達(dá)水平、甲基化狀態(tài)以及與臨床病理學(xué)資料之間的關(guān)系
　　2.1食管鱗癌組織中RASSF7基因mRNA的表達(dá)
　　RASSF7基因mRNA在食管鱗癌組織中的相對(duì)表達(dá)量(0.6

8、3±0.08)顯著高于相應(yīng)癌旁正常組織(0.42±0.20)，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.184，P=0.000)。在食管鱗癌患者中，RASSF7的mRNA表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(P=0.000)及腫瘤組織分化程度(P=0.000)有關(guān)，而與腫瘤組織的分期(P=0.116)以及患者的年齡（P=0.167）、性別(P=0.615)無關(guān)。2.2食管鱗癌組織中RASSF7基因蛋白的表達(dá)
　　69例食管鱗癌組織中，RASSF7基因

9、的蛋白表達(dá)陽性率(81.2％，56/69)顯著高于相應(yīng)癌旁正常組織(53.6％，37/69)，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。在食管鱗癌中，RASSF7基因蛋白表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P=0.009）和腫瘤組織的分化程度有關(guān)（P=0.000），而與年齡(P=0.707)、性別(P=0.772)以及腫瘤組織的分期(P=0.630)無關(guān)。
　　2.3食管鱗癌組織中RASSF7基因的甲基化狀態(tài)
　　啟動(dòng)子區(qū)遠(yuǎn)端及啟動(dòng)

10、子區(qū)近端的3對(duì)甲基化引物在69例ESCC組織及相應(yīng)癌旁正常組織中均未檢測(cè)到RASSF7的甲基化。
　　2.4 RASSF7基因mRNA和蛋白表達(dá)之間的關(guān)系
　　在RASSF7基因蛋白表達(dá)陽性的食管鱗癌組織中，其mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.65±0.07，RASSF7基因蛋白表達(dá)陰性的食管鱗癌組織中，其mRNA相對(duì)表達(dá)量為0.54±0.04，兩者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.144，P=0.000＜0.05)。
　　結(jié)論: