食管鱗癌中多腫瘤標(biāo)記物表達(dá)的臨床意義.pdf

1、背景
　　 惡性腫瘤是目前嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病之一，我國惡性腫瘤的發(fā)病人數(shù)約占全球20％，死亡人數(shù)約占全球24％。而食管癌(Esophageal carcinoma，EC)是世界上六大惡性腫瘤之一，其主要的流行病學(xué)特征是顯著的地區(qū)分布差異，高低發(fā)區(qū)EC的發(fā)病率最大可相差500倍。河南省林州市是世界EC發(fā)病率及死亡率最高的地區(qū)之一，包括與其相鄰的輝縣及安陽等地。EC預(yù)后極差，中晚期病人的5年生存率僅為10％左右。大多的EC病

2、人在臨床確診后平均生存時間不到一年，死亡率相當(dāng)高。盡管近年來對EC進(jìn)行了多學(xué)科的綜合性研究，并提出EC的發(fā)生發(fā)展是一個多階段多因素參與的復(fù)雜過程，但是，高發(fā)區(qū)的EC發(fā)病率及死亡率仍未得到明顯的改善，到目前為止仍然是這些地區(qū)腫瘤相關(guān)死亡的主要原因之一。因此，闡明EC多階段演變的分子機制，篩選及鑒定與EC癌變關(guān)系密切的預(yù)警分子，尋找高敏感、高特異的診斷標(biāo)志物，尋找與鑒定新的治療靶點，具有重要的理論意義，并為EC高發(fā)區(qū)高危人群提供重要的篩查、

3、早期診斷、預(yù)后及治療監(jiān)測的生物標(biāo)志物，以期降低EC發(fā)病率及病死率。
　　 我們課題組利用系統(tǒng)的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，包括二維電泳、穩(wěn)定同位素標(biāo)記(SILAC、iTRAQ)、二維液相色譜、ESI串聯(lián)質(zhì)譜、MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜等技術(shù)，全面鑒定了食管癌鱗癌(Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)蛋白差異表達(dá)譜。目前，我們已經(jīng)鑒定了156個與ESCC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的差異表達(dá)的蛋白質(zhì)分子，如

4、MIF(Macrophage migration inhibitory factor)、prohibitin、HSP27(Heat shock protein27)、annexinA2、GRP94(Glucoseregulated protein)、stratifin、CD(Cathepsin D)等。
　　 熱休克蛋白HSP27是小分子熱休克蛋白(Smallheatshockprotein，sHSP)亞家族中的主要成員之一，它

5、的主要生物學(xué)功能是在各種應(yīng)激因素下避免細(xì)胞受到損傷，并參與細(xì)胞的增殖分化、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。近年的研究發(fā)現(xiàn)HSP廣泛的參與了腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期調(diào)控、增殖及凋亡、分化，并與腫瘤免疫、多藥耐藥等有密切關(guān)系。在多種腫瘤中HSP27高表達(dá)與腫瘤預(yù)后有關(guān)，但在不同的腫瘤中生物學(xué)功能及臨床意義不同。
　　 GRP94是分子量為94的葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(Glucoseregulated protein，GRPs)，是HSP90家族的成員，作為分子伴侶

6、之一，其主要功能是協(xié)助蛋白折疊、伸展、組裝和表達(dá)，抑制錯誤折疊蛋白的分泌。GRP94與腫瘤細(xì)胞的分化和侵襲有關(guān)，還可以促使腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、耐藥性獲得等，在腫瘤治療及預(yù)后中具重要意義。
　　 巨噬細(xì)胞游走抑制因子MIF是在T淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種可溶性、多功能細(xì)胞因子，與免疫細(xì)胞的活化有關(guān)，具有抑制巨噬細(xì)胞移動的功能，還可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分離及移動，有利于腫瘤細(xì)胞的組織侵襲過程，且表達(dá)水平與患者的預(yù)后關(guān)系密切。
　　 C

7、D(組織蛋白酶D)是一種天冬氨酸肽鏈內(nèi)切酶，包括前體(Pro-cathepsin D，pCD，MW 52 kDa)、中間體(MW 48 kDa)以及成熟體(MW，34 kDa)。CD的生理功能是在溶酶體的酸性環(huán)境中降解蛋白質(zhì)，但在病理狀態(tài)下，CD可降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，促進(jìn)惡性腫瘤的侵襲和遷移等生物學(xué)過程。近年的研究發(fā)現(xiàn)，CD的高表達(dá)與腫瘤早期復(fù)發(fā)相關(guān)，并提示預(yù)后不良。
　　 本研究首先應(yīng)用免疫印跡(Western blot)

8、技術(shù)驗證了上述蛋白質(zhì)分子CD、pCD、MIF、GRP94、HSP27在ESCC及癌旁組織中的差異表達(dá)；然后應(yīng)用免疫組化(Immunohistochemistry，IHC)技術(shù)探討了HSP27、GRP94、MIF在具有5年生存期隨訪資料ESCC蠟塊組織標(biāo)本中的表達(dá)規(guī)律和特征，進(jìn)而分析HSP27、GRP94、MIF表達(dá)與ESCC臨床病理資料的相關(guān)性及在預(yù)后中的作用，為食管癌的分子診斷及預(yù)后評估的分子標(biāo)志物的篩選及鑒定提供實驗證據(jù)。
　

9、　 目的
　　 通過研究CD、pCD、MIF、GRP94、HSP27等多個腫瘤標(biāo)志物在各TNM分期的ESCC組織的表達(dá)特征及規(guī)律，確定其與ESCC患者臨床病理資料相關(guān)性，評價多個腫瘤標(biāo)志物在ESCC術(shù)后風(fēng)險預(yù)警作用；進(jìn)一步明確食管鱗癌多階段、多分子演進(jìn)的分子機制，為建立高危人群篩查、早期診斷和預(yù)后評估的生物指標(biāo)及手段奠定良好的工作基礎(chǔ)。
　　 方法
　　 1.Western blot檢測CD、pCO、MIF、G

10、RP94、HSP27等蛋白質(zhì)分子在ESCC及癌旁手術(shù)切除標(biāo)本組織中的差異表達(dá)；
　　 2.IHC檢測HSP27、GRP94和MIF在各TNM分期的ESCC組織的表達(dá)特征及規(guī)律，分析其與ESCC患者臨床病理資料相關(guān)性及ESCC術(shù)后風(fēng)險預(yù)警作用。
　　 結(jié)果
　　 1.Western blot驗證了CD、pCD、MIF、GRP94在ESCC組織中表達(dá)明顯升高，而HSP27的表達(dá)降低；
　　 2.ESCC組織中

11、GRP94的高表達(dá)與分化程度呈正相關(guān)(P=0.002)，MIF、GRP94的表達(dá)增高與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.047，P=0.016)、TNM分期(P=0.008，P=0.002)、ESCC患者術(shù)后5年生存期縮短(p=0.01，P=0.001)呈正相關(guān)；
　　 3.HSP27的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.004)、TNM分期(P=0.008)、ESCC患者術(shù)后5年生存期縮短(P=0.007)呈負(fù)相關(guān)；
　　 4.Cox多因素分