楊梅葉原花色素的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)理.pdf

1、楊梅(Myrica rubra Sieb.et Zucc.)是我國重要的果樹資源，有著2000多年的栽培歷史，楊梅葉常綠，原花色素(PAs)含量高，以獨(dú)特的表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)作為其末端單元和大部分延伸單元，具有抗氧化，抗菌，減肥，抗癌和抗炎活性，然而其神經(jīng)保護(hù)活性尚未見諸報(bào)道。楊梅葉原花色素的平均聚合度(mDP)(～6.7)低于葡萄籽(GSPA)和藍(lán)莓的原花色素，由于平均聚合度與其活性密切相關(guān)，研究不同聚合度

2、的原花色素對其神經(jīng)保護(hù)活性的影響值得進(jìn)一步探討。本研究基于β-淀粉樣蛋白(Aβ)模型，以楊梅葉原花色素單體(EGCG)為陽性對照，研究了兩種楊梅葉原花色素(BLPs)(Sephadex-LH20純化的BLPs(SPBLPs)和超聲降解的BLPs(UDBLPs))的神經(jīng)保護(hù)作用，并分別通過分子、細(xì)胞和動物層面確定了其在抑制Aβ寡聚化，空間結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變和神經(jīng)毒性，阻斷SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞凋亡，改善模式小鼠學(xué)習(xí)與空間記憶功能，減少腦內(nèi)斑塊的沉積

3、的潛在功能和可能的機(jī)制。結(jié)果如下:
　　1.楊梅葉原花色素能通過與Aβ結(jié)合形成復(fù)合物來干擾Aβ的自發(fā)聚集作用，從而抑制Aβ原纖維生成，Aβ形態(tài)變化和Aβ二級結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，并且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。通過Aβ與原花色素結(jié)合時熱力學(xué)函數(shù)的變化得出，低平均聚合度的原花色素與Aβ具有更加緊密的結(jié)合作用。分子對接模擬結(jié)果顯示，隨著平均聚合度mDP的變化，原花色素靶向Aβ的結(jié)合位點(diǎn)也有所不同，低平均聚合度的原花色素更加靠近N端區(qū)域與核心疏水區(qū)HHQK序

4、列，形成的復(fù)合物也更加穩(wěn)定。
　　2.楊梅葉原花色素能減輕Aβ寡聚體誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性作用，影響神經(jīng)細(xì)胞的存活狀態(tài)，同時，UDBLPs的作用比SPBLPs強(qiáng)得多，在Aβ誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性模型中兩種楊梅葉原花色素的神經(jīng)保護(hù)作用均在20μg/mL的劑量達(dá)到最大值。免疫印跡結(jié)果顯示，楊梅葉原花色素能夠上調(diào)Bcl-2與Bax比值，同時下調(diào)下游的caspase-3表達(dá)水平，從而進(jìn)一步阻斷由Aβ寡聚體誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡。
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5、.為了進(jìn)一步探究楊梅葉原花色素在神經(jīng)保護(hù)活性上與葡萄籽原花色素(GSPA)的差別，選取活性較好的低聚原花色素UDBLPs、EGCG與GSPA進(jìn)行比較。動物實(shí)驗(yàn)表明，四個月大的APP/PSN轉(zhuǎn)基因小鼠在經(jīng)過UDBLPs，GSPA和EGCG藥物干預(yù)兩個月以后，經(jīng)過Morris水迷宮測試后發(fā)現(xiàn)，低聚楊梅葉原花色素能夠較為明顯地改善小鼠的學(xué)習(xí)與空間記憶水平。免疫組化與免疫印跡結(jié)果顯示，相比于空白對照組，經(jīng)過低聚楊梅葉原花色素干預(yù)后的APP/PS