南酸棗皮原花色素結(jié)構(gòu)組成及其生物活性.pdf

1、原花色素（Proanthocyanidins）是植物中常見的一大類具有C6-C3-C6基本結(jié)構(gòu)的聚多酚類物質(zhì)，具有抗氧化、抗菌、抗炎癥、抗癌以及預(yù)防和治療心腦血管疾病、二型糖尿病等眾多生物活性。南酸棗（Choerospondias axillaris），又名廣棗，其干燥成熟果實(shí)是蒙藥的習(xí)用藥材，用于治療心肌缺血、心律失常等心腦血管疾病；南酸棗鮮果味酸、澀，不耐儲(chǔ)藏，目前對(duì)南酸棗的開發(fā)利用側(cè)重于對(duì)鮮果果實(shí)的加工，在加工過程中會(huì)產(chǎn)生大量富含

2、生物活性物質(zhì)的棗皮副產(chǎn)物，這些副產(chǎn)物常作為廢棄物被丟棄，因此不僅造成資源的浪費(fèi)，還對(duì)環(huán)境造成污染。
　　為了深入了解南酸棗皮的利用價(jià)值，本研究首先以南酸棗皮和棗肉為原料，采用超聲輔助提取、大孔吸附樹脂純化等方法提取、純化南酸棗皮和棗肉酚類化合物，采用UPLC、UPLC-QTOF-MS2等方法對(duì)比分析棗皮及棗肉提取物中酚類化合物的含量和種類；同時(shí)測(cè)定兩種提取物抗氧化、抗菌及抗癌細(xì)胞增殖活性；進(jìn)一步采用大孔吸附樹脂、葡聚糖凝膠LH-2

3、0層析柱分離純化南酸棗皮原花色素提取物，采用光譜分析、酸催化降解、UPLC、UPLC-QTOF-MS等方法分析原花色素的結(jié)構(gòu)組成；同時(shí)利用葡聚糖凝膠LH-20層析柱將南酸棗皮原花色素提取物分級(jí)純化成具有不同平均聚合度的組分，測(cè)定各原花色素組分對(duì)碳水化合物水解酶的抑制活性、抗氧化活性、抗癌細(xì)胞增殖活性；研究南酸棗皮原花色素提取物在體內(nèi)外的抗血管生成能力。主要研究結(jié)果如下：
　　1.南酸棗皮提取物中總酚含量顯著高于棗肉提取物，兩種提取

4、物主要酚類化合物均是兒茶素（Catechin）和低聚原花青素（Oligomeric Procyanidine）；此外，兩種提取物都具有優(yōu)秀的鐵離子還原能力（FRAP）、DPPH自由基清除能力和總抗氧化能力，并呈劑量依賴關(guān)系；南酸棗皮提取物對(duì)所選食源性致病菌的抑菌活性高于棗肉提取物；兩種提取物對(duì)肝癌細(xì)胞（HepG2）和結(jié)腸癌細(xì)胞（Caco-2）的抗增殖作用都隨樣品作用劑量和作用時(shí)間的增加而增強(qiáng)。
　　2.進(jìn)一步研究南酸棗皮中原花色素

5、的結(jié)構(gòu)組成，結(jié)果顯示南酸棗皮原花色素主要為原花青素型，延伸單元為表兒茶素沒食子酸酯（Epicatechin gallate）、表兒茶素（Epicatechin）和兒茶素（Catechin），此外還含有少量的表?xiàng)攦翰杷兀‥pigallocatechin）；末端單元主要由兒茶素組成；各組成單元間通過B型鍵連接；大部分原花色素組分表現(xiàn)出很強(qiáng)的α-淀粉酶和α-葡糖苷酶抑制活性，并呈劑量依賴關(guān)系；南酸棗皮原花色素對(duì)α-淀粉酶和α-葡糖苷酶的抑制作

6、用隨其平均聚合度和棓酸酯化度的增加而增強(qiáng)。
　　3.在體外化學(xué)抗氧化測(cè)定模型（DPPH、ABTS、FRAP和磷鉬酸法）中，各原花色素組分都表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化活性，但原花色素組分的抗氧化活性與其平均聚合度間的相關(guān)性差；利用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）建立細(xì)胞內(nèi)抗氧化模型，原花色素組分的細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性隨其平均聚合度的增加而減小。
　　4.利用CCK-8法，測(cè)定不同平均聚合度原花色素組分對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞（Caco-2）的抗增殖活性

7、，結(jié)果顯示原花色素組分對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗增殖活性隨其平均聚合度的增加而增強(qiáng)，平均聚合度最高的組分具有最強(qiáng)的抗癌細(xì)胞增殖能力；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示南酸棗皮原花色素可以誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，并且隨著原花色素組分平均聚合度的增加其誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的能力隨之增強(qiáng)；原花色素誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡既通過胞內(nèi)線粒體途徑又通過胞外死亡受體途徑。
　　5.利用體外細(xì)胞模型和體內(nèi)轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型評(píng)估南酸棗皮原花色素提取物的抗血管生成能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果