醫(yī)院空氣環(huán)境微生物污染檢測方法建立及其應用研究.pdf

1、空氣中微生物與抗生素抗性基因（Antibiotic Resistance Genes,ARGs）污染得到人們越來越多的關注。醫(yī)院因其場所的特殊性，存在著潛在的病原菌與ARGs污染問題。然而，目前對城市醫(yī)院環(huán)境空氣微生物與ARGs污染狀況的研究較少，缺乏人群在醫(yī)院環(huán)境暴露風險的基礎數(shù)據(jù)。本論文基于非培養(yǎng)的研究手段，建立了一套適合醫(yī)院空氣環(huán)境的微生物污染的檢測方法，并將該方法加以應用。論文研究了醫(yī)院環(huán)境空氣微生物群落結構、病原菌及ARGs污

2、染狀況，基于該研究結果對人群在醫(yī)院環(huán)境的暴露狀況進行評估，以了解醫(yī)院空氣生物污染狀況，并初步探索了人群在醫(yī)院的暴露風險。
　　研究建立了一種基于非培養(yǎng)的醫(yī)院空氣環(huán)境微生物污染的檢測方法。布點原則遵循空氣微生物監(jiān)測的標準，采樣方法為大流量TSP（Total Suspended Particulate）采樣器采集；采樣時間在22～26h之間；采樣膜預處理方法為酸性磁珠法；DNA樣品濃度的定量采用Qubit熒光法。對醫(yī)院空氣環(huán)境DNA樣

3、品采用高通量測序技術和實時熒光定量PCR技術（qPCR）研究其空氣微生物的組成特征，病原菌及抗生素抗性基因的污染狀況。
　　基于16S rRNA基因擴增片段的高通量測序結果表明：醫(yī)院空氣環(huán)境微生物的主導菌門為變形菌門、厚壁菌門等，空氣中病原菌的平均比例為3.64％，主導病原菌為腐生葡萄球菌、棒狀桿菌、大腸埃希氏菌等。典型醫(yī)院空氣的主導菌群和病原菌在冬夏季間差異明顯，病原菌比例夏季稍高于冬季；主導菌群的分布在空氣介質(zhì)與塵土介質(zhì)間略微

4、不同，而病原菌比例塵土介質(zhì)顯著高于空氣介質(zhì)，表明塵土介質(zhì)是醫(yī)院環(huán)境病原菌的一個潛在存儲庫。qPCR定量實驗的結果顯示：醫(yī)院空氣中β-內(nèi)酰胺類ARGs相對濃度均值最大，與β-內(nèi)酰胺類抗生素的使用率較高有關；其中β-內(nèi)酰胺類的blaTEM基因與大環(huán)內(nèi)酯類的ermB基因是醫(yī)院環(huán)境污染最嚴重的兩種基因；典型醫(yī)院四種ARGs（blaTEM、ermB、blaCTX-M、mecA）的污染在季節(jié)間差異不顯著，空氣介質(zhì)中的相對濃度在103～107copi

5、es/ng范圍內(nèi)，醫(yī)院環(huán)境空氣介質(zhì)ARGs污染不容忽視。
　　采用估算呼吸吸入潛在劑量值的方法來評估醫(yī)院環(huán)境空氣生物污染物暴露風險，結果顯示：病人每次輸液就診時可吸入細菌氣溶膠高于433CFU（Colony-Forming Units），其中可入肺細菌氣溶膠高于145CFU，可入肺病原菌高于5CFU；門診部的醫(yī)護人員氣溶膠暴露風險最大；醫(yī)院環(huán)境ARGs暴露劑量為105～106copies/h，β-內(nèi)酰胺類ARGs的暴露風險最大，且