瘤胃微生物Real Time PCR定量方法的建立及其應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究分別以產甲烷菌、原蟲和瘤胃細菌為例，根據其16S/18SrDNA序列、ITS序列和特有蛋白的基因序列，利用RealTimePCR技術，分別在種和類的水平上，建立了對瘤胃微生物絕對定量與相對定量的分子生物學方法，為瘤胃微生物的研究提供了一種快速、準確的方法。同時，應用此方法研究了植物油對瘤胃中產甲烷菌數量、氫化細菌數量及原蟲數量的影響，探討了植物油降低瘤胃微生物甲烷產量的途徑。　　利用AccⅠ、EcoRⅠ，PstⅠ、PvuⅡ、Sa

2、cⅠ、SmaⅠ等6種限制性內切酶將基因組酶切，通過Southern雜交確定M.formicicum的16SrDNA序列在基因組中有2個拷貝。　　以ITS為靶序列，采用SYBRGreenⅠ熒光染料RealTimePCR法成功對M.mazei進行了定量檢測，有效檢測靈敏度可達300拷貝/25μL體系。同時，以微生物合成甲烷過程中的關鍵酶mcrA基因為靶基因，采用SYBRGreenⅠ熒光染料RealTimePCR法，建立了瘤胃總產甲烷菌相對

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