萊菔硫烷對鎘致大鼠肝腎毒性保護作用的實驗研究.pdf

1、鎘（Cadmium，Cd）是環(huán)境中常見的對人體毒性很強的重金屬污染物，在工業(yè)中用途廣泛，主要用于電鍍，顏料，合金，電池等，相當數(shù)量的鎘通過工業(yè)企業(yè)排出的廢氣、廢水、廢渣污染環(huán)境，我國每年就有600余噸鎘排入環(huán)境，造成嚴重的環(huán)境污染。鎘對人體肺部、肝臟、腎臟、心血管系統(tǒng)、骨骼、泌尿生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)（聽覺系統(tǒng)）等都會造成損害。肝臟和腎臟是鎘最重要的蓄積部位和主要靶器官，因此，研究鎘對肝臟和腎臟損傷的機制及其保護因素具有重要意義。

2、
　　目的：
　　萊菔硫烷(Sulforaphane，SFN)廣泛存在于十字花科植物中，具有較強的抗氧化能力，這些植物中含有豐富的硫代葡萄糖，其水解后生成異硫氰酸鹽，異硫氰酸鹽以萊菔硫烷為主要形式存在。研究表明，萊菔硫烷通過激活核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor erythroid2-related factor, Nrf2)，進而調(diào)節(jié)二相酶和抗氧化酶發(fā)揮生物功能。
　　方法：
　　一、急性多

3、次染鎘實驗
　　由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供的清潔級Wistar大鼠48只，體重170±10 g，雌雄各半，實驗動物合格證號:SYXK（遼）2008-0005。動物實驗室溫度17-23℃，相對濕度45-55％。普通光照，動物飼料由實驗動物中心提供。正式實驗前飼養(yǎng)1周。按體重隨機分成4組，每組12只，雌雄各半。第1組為對照組，第2、3組為低、高劑量單純?nèi)炬k組，第4組為SFN干預(yù)組。1-3組大鼠皮下注射生理鹽水，SFN干預(yù)組2 mg

4、/kg SFN皮下注射;2h后，對照組腹腔注射生理鹽水，2-4組分別腹腔注射4、12、12μmol/kg CdCl2，注射容量均為5 mg/kg。連續(xù)處理5天。最后一次染毒24 h后，將各組大鼠乙醚麻醉，取8只腹主動脈采血，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine transaminase，ALT）和乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)活力;心臟放血處死，切取肝組織制備成勻漿，測定還原型谷胱甘肽(Glutathio

5、ne，GSH)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)活力;另取4只心臟放血處死，切取肝組織制備成單細胞懸液用于測定活性氧簇(Reactiveoxygen specie，ROS)水平和細胞凋亡率。
　　二、亞慢性染鎘實驗
　　由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供的清潔級W

6、istar大鼠48只，體重170±10 g，雌雄各半，實驗動物合格證號:SYXK（遼）2008-0005。動物實驗室溫度17-23℃，相對濕度45-55％，動物飼料由實驗動物中心提供。正式實驗前飼養(yǎng)1周。按體重隨機分成4組，每組12只，雌雄各半。第1組為對照組，第2、3組為低、高劑量單純?nèi)炬k組，第4組為SFN干預(yù)組。1-3組大鼠皮下注射生理鹽水，SFN干預(yù)組1 mg/kg SFN皮下注射;2h后，對照組腹腔注射生理鹽水，2-4組分別腹腔

7、注射3、6、6μmol/kg CdCl2，注射容量均為5 mg/kg。皮下注射隔日1次，每周3次，腹腔注射每日1次，每周5次，連續(xù)處理6周。將各組6只大鼠放入代謝籠，收集24 h尿液，測定尿蛋白含量，及堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-beta-D-glucasaminidase，NAG)的活力;

8、而后將各組大鼠乙醚麻醉，取各組8只大鼠進行腹主動脈取血，測定血清尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）的含量;然后處死大鼠，取出腎臟，冰浴下切取腎皮質(zhì)，制備成勻漿液待用，測定谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量，及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力;另取各組剩余4只大鼠麻醉后心臟放血處死，于冰浴下切取大鼠腎皮質(zhì)，制備單細胞懸液用于測定ROS含量和細胞凋亡壞死率;檢測Nrf2及下游基

9、因血紅素氧合酶-1(Heme oxygenase-1，HO-1)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（Gamma-Glutamylcysteine synthetase，γ-GCS）的mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　一、急性多次染鎘實驗
　　與對照組比較，隨著染鎘劑量的增加，大鼠血清LDH、ALT活力逐漸升高，肝組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力逐漸降低，MDA的含量逐漸升高，細胞內(nèi)ROS水平和細胞凋亡壞死率逐漸升

10、高。與高鎘組比較，萊菔硫烷干預(yù)組中大鼠血清LDH和ALT活力明顯下降，肝組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力明顯升高，MDA的含量明顯下降，肝細胞ROS水平和細胞凋亡率明顯下降。
　　二、亞慢性染鎘實驗
　　與對照組比較，隨著染鎘劑量的增加，大鼠血清BUN的含量逐漸升高，尿蛋白含量、尿NAG、ALP及LDH活力逐漸升高，腎組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力逐漸降低，MDA的含量逐漸上升，細胞ROS水平和細胞凋亡壞死

11、率逐漸升高，Nrf2、HO-1和γ-GCS的mRNA和蛋白表達水平逐漸升高。與高鎘組比較，萊菔硫烷干預(yù)組大鼠血清BUN含量明顯下降，尿蛋白含量、尿NAG、ALP及LDH活力明顯下降，腎組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力明顯升高，MDA的含量明顯下降，細胞ROS水平和細胞凋亡率明顯降低，Nrf2、HO-1和γ-GCS的mRNA和蛋白表達水平明顯上升。
　　結(jié)論：
　　1、氯化鎘急性多次染毒可致大鼠肝臟出現(xiàn)氧化損傷，萊菔硫