前列環(huán)素衍生物對慢性腎衰大鼠腎臟局部RAS系統(tǒng)關(guān)鍵因子表達的影響.pdf

1、目的：
　　建立慢性腎衰竭（chronic renal failure， CRF）大鼠模型，研究前列環(huán)素（ Prostacyclin， PGI2）衍生物對 CRF大鼠腎臟局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system，RAS）系統(tǒng)關(guān)鍵因子血管緊張素II（angiotensin II， Ang II）、血管緊張素（1-7）[Ang-（1-7）]、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（Angiotensin converti

2、ng enzyme2，ACE2）、血管緊張素II1型受體（AT1R）表達的影響，研究前列環(huán)素衍生物對CRF的可能保護機制。
　　方法：
　　行5/6腎切除建立大鼠CRF模型。將大鼠隨機分為假手術(shù)組即對照組、CRF模型組和前列環(huán)素衍生物治療組，每組均10只。5周后檢測各組大鼠血清肌酐（Serum creatinine，Scr）、尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN），并隨機取各組大鼠一只行腎臟組織病理切片染色

3、觀察腎組織病理改變，判斷大鼠模型是否建立成功。治療組第5周開始給予前列環(huán)素衍生物貝前列腺素鈉（ Beraprost sodium,BPS）0.6mg/kg/d，分兩次灌入，共4周。模型組和對照組大鼠給予等量蒸餾水。第9周時對全部大鼠進行處死。觀察以下指標：1.藥物干預前后大鼠24h尿蛋白總量、血肌酐、尿素氮值變化；2.三組大鼠腎組織蘇木精-伊紅(HE)染色法和馬松三色染色法（Masson）的病理表現(xiàn)；3.實時熒光定量 PCR（real-

4、time RT-PCR，qRT-PCR）、. Western blot、免疫熒光檢測第9周時腎組織中ACE2、AT1mRNA及蛋白濃度變化；4.酶聯(lián)免疫法吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）分別檢測第9周腎組織中Ang II、Ang-（1-7）濃度及血清中5周、9周時ACE2、AngII、Ang（1-7）、AT1的濃度變化；
　　結(jié)果：
　?。?）動物模型的驗證：腎功能：模

5、型組Scr、BUN顯著上升；24小時尿蛋白排泄量明顯升高；腎臟病理組織變化：腎小球系膜細胞肥厚，小管-間質(zhì)明顯纖維化伴炎癥細胞浸潤，可見蛋白管型。這些生化及腎臟病理均提示建模成功。經(jīng)過BPS治療4周后，治療組腎小球系膜細胞增生、腎小管-間質(zhì)纖維化、炎癥細胞浸潤程度較模型組均明顯減輕。
　?。?）整個實驗期間，對照組24h尿蛋白、Scr、BUN均無明顯變化；與對照組相比，5周時模型組、治療組24h尿蛋白、Scr、BUN均增加（P<0

6、.05)；與模型組（5周時）相比，9周時模型組Scr、BUN下降（P<0.05），24小時尿蛋白總量上升（P<0.05）；治療組經(jīng)過BPS灌胃4周后（9周），與5周時治療組相比，24h尿蛋白下降（P<0.05），而Scr、BUN水平未見明顯變化。
　?。?）9周時腎組織實時熒光定量PCR（Real timeRT-PCR，qRT-PCR）、Western blot，免疫熒光結(jié)果顯示：與對照組相比，模型組大鼠腎組織ACE2表達下調(diào)（P

7、<0.05），AT1表達上調(diào)（P<0.05）；與模型組相比，治療組ACE2表達上調(diào)（P<0.05），AT1表達下調(diào)（P<0.05）。
　?。?）ELISA結(jié)果顯示：
　　腎臟：與對照組相比，9周時模型組大鼠AngII濃度明顯增加（P<0.01）， Ang(1-7)濃度顯著下降（P<0.01）；與9周時模型組相比，9周時治療組AngII濃度減少（P<0.05），Ang(1-7)濃度顯著增加（P<0.01）；
　　血清：對

8、照組、模型組5周、9周時組內(nèi)AngII、Ang（1-7）、ACE2、AT1濃度均無明顯變化（P>0.05）。與對照組相比，5周時模型組、治療組大鼠AngII、AT1濃度增加（P<0.05），Ang(1-7)、ACE2濃度下降（P<0.05），其中模型組、治療組相比無明顯差異（P>0.05）；與5周時治療組相比，經(jīng)過BPS干預4周后（9周）治療組，AngII濃度減少（P<0.05）、Ang(1-7)濃度增加（P<0.05），而AT1、AC