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文檔簡介
1、背景及目的:
糖尿病是一種慢性的、系統(tǒng)的代謝性疾病,并且該疾病已經(jīng)成為一個全球性的健康問題,其在我國的總體發(fā)病率高達11.6%,在美國,它也影響了美國人口的8.3%。糖尿病膀胱功能障礙(DBD)是糖尿病泌尿并發(fā)癥之一,它影響超過50%的糖尿病患者。早期發(fā)病隱匿,糖尿病患者和臨床醫(yī)生常常不重視,直到DBD疾病進展到后期,因為患者逼尿肌收縮減弱至消失,患者出現(xiàn)過度活動的膀胱(OAB),尿潴留、尿急,排尿障礙以及排尿感覺的下降,其嚴(yán)
2、重影響生活質(zhì)量。
目前對DBD中膀胱興奮性的降低研究主要集中在神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控上,臨床上治療DBD也多使用神經(jīng)制劑,但多數(shù)患者療效不甚滿意。國內(nèi)外相關(guān)研究已經(jīng)證實膀胱肌源性興奮性異常是逼尿肌興奮性變化的重要環(huán)節(jié)之一,其中膀胱ICC細胞是肌源性興奮性的調(diào)控中樞,更進一步的研究發(fā)現(xiàn)KCa/ClCa離子通道是影響ICC興奮性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究以與膀胱興奮性和收縮耦聯(lián)密切相關(guān)的膀胱ICC以及ICC細胞的KCa/ClCa離子通道為新的切入
3、點,探討DBD發(fā)病機理中神經(jīng)損害以外的機制,結(jié)果將有助于進一步闡明DBD的發(fā)生機理,并為臨床治療提供新的可能靶點。
方法:
本研究以SD大鼠為研究對象,經(jīng)STZ誘導(dǎo)構(gòu)建糖尿病膀胱功能障礙模型。首先,ICC細胞特異性表達C-Kit蛋白,因此本實驗通過通過酶消化法獲得ICCs,利用PE-C-Kit抗體流式檢測上述方法培養(yǎng)的ICCs純度。再通過免疫熒光和RT-PCR技術(shù)對比檢測正常及DBD膀胱ICC細胞中各KCa/ClCa
4、通道亞型(BKCa、SKCa2、SKCa3、ClCa)的表達情況。最后,采用RT-PCR和免疫熒光雙標(biāo)檢測不同葡萄糖濃度對正常膀胱ICC細胞的KCa/ClCa通道各亞型表達。
結(jié)果:
1.通過酶消化法獲得的細胞純度在96%,純度較高,可以滿足后續(xù)實驗的需要。
2.與正常組相比,糖尿病ICCs中BKCa、SKCa2、SKCa3的mRNA表達量和蛋白表達量均明顯升高,而ClCa表達量明顯降低。
3.隨
5、著葡萄糖濃度的提高,BKCa、SKCa2、SKCa3的mRNA表達量和蛋白表達量呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢,ClCa的表達量則呈現(xiàn)不斷降低的趨勢。
結(jié)論:
1.根據(jù)ICC樣細胞和逼尿肌細胞貼壁能力的不同,我們獲得了高純度的膀胱ICC樣細胞。
2.利用Q-PCR技術(shù)和免疫熒光技術(shù),檢測出糖尿病組ICCs中BKCa、SKCa2、SKCa3的mRNA表達量和蛋白表達量較正常組明顯增高,而ClCa的表達量較正常組降低,表明
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