波爾山羊亞種間體細(xì)胞克隆——核與胞質(zhì)相容性對克隆胚胎發(fā)育影響的研究.pdf

1、同濟(jì)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院博士學(xué)位論文波爾山羊亞種間體細(xì)胞克隆——核與胞質(zhì)相容性對克隆胚胎發(fā)育影響的研究姓名：陳建泉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：基因工程與蛋白質(zhì)工程指導(dǎo)教師：成國祥20070301摘要生存活克隆羊的效率顯著低于試驗組I I ( 4 ．5 5 ％V S ．．9 ．0 9 ％，p < O ．0 5 ) 。上述結(jié)果表明供核細(xì)胞的兩次饑餓是一種較好的供核細(xì)胞處理方法，并己成為本實驗室供核細(xì)胞處理的常規(guī)方法。二、波爾J l I

2、羊弧種間體細(xì)胞克隆的研究。基于波爾山羊和薩能奶I | I 羊這兩種弧種間S C N T 尚未獲得克隆后代，對此，我們作了兩個層次的] 二作。第一，把彳i 同年齡波爾l I I 羊的成纖維細(xì)胞移植到去核的薩能奶l _ I I 羊M I I 期卵母細(xì)胞，探索Ⅱ種間克隆效率是否和供核波爾羊的年齡有關(guān)。結(jié)果表明，采用3 歲和9 歲波爾羊成纖維細(xì)胞構(gòu)建的弧種間S C N T 胚胎早期妊娠雖可分別達(dá)到4 5 ．6 ％和2 8 ．6 ％，但均無克隆后

3、代出生，唯有2 月齡波爾I J I 羊成纖維細(xì)胞構(gòu)建的亞種間S C N T 胚胎，早期妊娠率達(dá)到5 0 ％，但最終僅l 頭克隆后代存活。這一結(jié)果證實，距種間的核移植是可以獲得克隆后代，但著床后克隆胎兒喪失率極高，克隆效率很低( 僅2 ．8 ％) ，克隆效率受供核羊的年齡影響。第二，把2 月齡波爾I J J 羊的成纖維細(xì)胞移入雜交F l 代羊( 薩能奶I I J 羊早×波爾羊古) 的去核M I I 期卵母細(xì)胞，并以薩能奶E l

4、I 羊的同種核移植作對照( 即奶I I I 羊成纖維細(xì)胞移入奶t 1 ．I 羊去核的M I I 期卵母細(xì)胞) 。結(jié)果顯示，盡管波爾山羊成纖維核移入雜交F 1 代羊的去核卵母細(xì)胞的重構(gòu)胚克隆效率為5 ．5 ％，較之同種克隆效率( 1 1 ．4 3 ％) 要低，但較上述第一個層次的亞種間克隆效率( 2 ．8 ％) 高出1 倍。該結(jié)果揭示了核質(zhì)之間的親緣關(guān)系的相容性對克隆胚胎的著床后發(fā)育潛力具有重大影響。三、核質(zhì)親緣相容互補性對亞種間體細(xì)胞克

5、隆胚胎著床后發(fā)育率的影響。本試驗是在上述實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)一步驗證不同親緣水平的核與胞質(zhì)的相容性對亞種間S C N T 胚胎發(fā)育率的影響。本研究構(gòu)建了6 種核質(zhì)問4 ；同相容性的S C N T 胚胎來比較核質(zhì)相容互補性對克隆效率的影響。其中，以波爾羊成纖維細(xì)胞作供核細(xì)胞，以去核的薩能奶I J f 羊( 見二) 、雜交F l 代羊( 薩能奶l I I 羊早×波爾I l I 羊杏，見二) 以及波爾| I j 羊等的卵分別作為核的受

6、體細(xì)胞，構(gòu)建了3 種S C N T 胚胎：又以薩能奶I l —I 羊卵作為核的受體細(xì)胞，以薩能奶1 I —I 羊、雜交F 1 代羊( 薩能奶L l I 羊早×波爾J 1 ．1 羊6 ) 、雜交F 2 代羊( 雜交F 1 羊早×波爾I I I 羊6 ) 的成纖維細(xì)胞分別作為供核細(xì)胞，構(gòu)建了3 種S C N T 胚胎。結(jié)果顯示，這些S C N T胚胎的著床前發(fā)育率沒有明顯的差異；然而，核與胞質(zhì)相容性彳i 同的S C N