SIRT1在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病中的作用.pdf

1、目的：糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，是發(fā)達(dá)國家和地區(qū)工作人群中首位致盲性疾病。研究DR的發(fā)病機(jī)制及保護(hù)性作用機(jī)制有助于對(duì)其進(jìn)行早期預(yù)防、早期治療，改善患者的生活質(zhì)量，降低致盲率。研究發(fā)現(xiàn)，沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（silent information regulator2 related enzyme1，SIRT1）可調(diào)節(jié)基因的活化，其持續(xù)低活性或低表達(dá)可增加對(duì)高糖

2、應(yīng)激的敏感性；H3K9乙酰化（H3K9 acetylation，H3K9ace）是基因活化的一個(gè)標(biāo)記物，高糖可誘導(dǎo)H3K9ace水平增高，引起相關(guān)炎癥因子和凋亡因子瀑布；α-硫辛酸是能量代謝中不可缺少的物質(zhì)，它可通過抗氧化作用抑制DR的發(fā)生發(fā)展。但其中的具體機(jī)制尚需進(jìn)一步探索。我們的研究旨在（1）觀察糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織和高糖環(huán)境培養(yǎng)下人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（human retina microvascular endothelial

3、cells，HRMECs）表達(dá)SIRT1、H3K9ace、IL-6和Bax的情況。（2）探討α-硫辛酸通過上調(diào)SIRT1對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜和高糖環(huán)境培養(yǎng)下HRMECs的保護(hù)性作用機(jī)制。
　　方法：（1）將SD大鼠（45只）隨機(jī)分為三組：對(duì)照組（15只），糖尿病組（15只）和α-硫辛酸干預(yù)糖尿病組（15只）。鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）腹腔注射30只SD大鼠建立糖尿病大鼠模型，2周后對(duì)藥物干預(yù)組進(jìn)行α-硫辛酸干

4、預(yù)，4周后取所有大鼠視網(wǎng)膜組織，分別進(jìn)行免疫組織化學(xué)、Western blot和RT-PCR檢測(cè)SIRT1、H3K9ace、IL-6和Bax的染色和表達(dá)。（2）培養(yǎng)HRMECs，分為正常糖組、高糖組、α-硫辛酸高糖干預(yù)組、白藜蘆醇高糖干預(yù)組和EX-527+α-硫辛酸高糖干預(yù)組，對(duì)各組進(jìn)行TUNEL試驗(yàn)，并分別進(jìn)行Western blot和RT-PCR檢測(cè)SIRT1、H3K9ace、IL-6和Bax的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）糖尿病大

5、鼠同對(duì)照組大鼠比較，視網(wǎng)膜組織中SIRT1陽性斑點(diǎn)較弱、表達(dá)下調(diào)，H3K9ace、IL-6和Bax陽性斑點(diǎn)增強(qiáng)、表達(dá)上調(diào)。α-硫辛酸可誘導(dǎo)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中SIRT1陽性斑點(diǎn)增強(qiáng)、表達(dá)上調(diào)，H3K9ace、IL-6和Bax陽性斑點(diǎn)減弱、表達(dá)下調(diào)。糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織SIRT1與H3K9ace、IL-6、Bax蛋白表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性；H3K9ace與IL-6、Bax蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)性。（2）同正常糖組比較，高糖組可誘導(dǎo)HRMECs凋亡的增

6、加；當(dāng)α-硫辛酸與高糖聯(lián)合培養(yǎng)后，高糖誘導(dǎo)的凋亡則減少；白藜蘆醇干預(yù)高糖組及在加入EX-527并且通過α-硫辛酸干預(yù)的高糖組的凋亡均較高糖組減少。高糖組SIRT1表達(dá)較正常糖組顯著減少，H3K9ace、IL-6和Bax表達(dá)較正常糖組增加；α-硫辛酸干預(yù)可誘導(dǎo)高糖組SIRT1表達(dá)增加，H3K9ace、IL-6和Bax表達(dá)下調(diào)；在SIRT1激動(dòng)劑RSV干預(yù)高糖組中H3K9ace、IL-6和Bax表達(dá)較高糖組明顯減少；在加入SIRT1抑制劑E

7、X-527并且通過α-硫辛酸干預(yù)的高糖組中，SIRT1蛋白表達(dá)較高糖組增加，H3K9ace表達(dá)較高糖組下調(diào)。SIRT1與H3K9ace、IL-6、Bax蛋白表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性；H3K9ace與IL-6、Bax蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)性。
　　結(jié)論：（1）在高糖狀態(tài)下，SIRT1表達(dá)受抑制，SIRT1在DR的發(fā)病中起重要作用。（2）DR發(fā)生發(fā)展過程中，SIRT1表達(dá)受抑制，H3K9ace表達(dá)上調(diào)，并且H3K9ace上調(diào)與炎癥因子和凋亡因子表